Imagerie par bioluminescence dans un modèle de souris EAE

Résumé

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p style='line-height :1.2 ;margin-bottom :0pt ;margin-top :0pt ;' dir='ltr'>Source : Schmitz, K., et al., Bioluminescence et imagerie proche infrarouge de la névrite optique et de l’inflammation cérébrale dans le modèle EAE de la sclérose en plaques chez la souris. J. Vis. Exp. (2017).

Cette vidéo montre la méthode de visualisation et de surveillance de l’encéphalomyélite auto-immune expérimentale ou de l’inflammation induite par l’EAE dans le nerf optique à l’aide de Imagerie par bioluminescence. Il comprend le positionnement de la souris, l’injection de réactif et la capture d’images séquentielles pour surveiller les changements de bioluminescence au fil du temps.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Imagerie bioluminescente de la névrite optique et de l’inflammation cérébrale

1. Configuration du système d’imagerie
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   1. Effectuer une imagerie in vivo avec tout équipement permettant l’analyse de la bioluminescence et des signaux dans le proche infrarouge.
   2. Gardez les souris sous anesthésie à l’isoflurane de 2 à 2,5 % pendant toutes les procédures d’imagerie.
   3. Placez une ou deux souris l’une à côté de l’autre dans l’appareil en utilisant les sources d’alimentation en gaz du milieu. Positionnez la partie supérieure de la colonne vertébrale au centre.
   4. Pour évaluer les effets des médicaments, comparez des paires de souris en utilisant deux souris simultanément, une par groupe. Ceci est important pour l’imagerie bioluminescente.
   5. Protégez le site d’immunisation avec un chiffon noir et prenez une photo et une image de base pour évaluer le positionnement correct de la souris ou des souris. Pour toutes les images, utilisez la mise au point B à une distance de 6,5 cm de l’appareil photo.
2. Injection et imagerie de la sonde d’inflammation bioluminescente
   1. Utilisez les paramètres du système d’imagerie in vivo : Epi-BLI, Em filter open, Ex filter block, fstop 1, binning 8, focus B = 6,5 cm, ad exposure 120 s ; Prenez une image de base.
   2. Injecter 100 μL i.p. du réactif chimiluminescent prêt à l’emploi (40 mg/mL). Bien mélanger avant de remplir la seringue.
   3. Capturez des images de bioluminescence 5, 10 et 15 min après l’injection. L’évolution temporelle du pic bioluminescent diffère entre les animaux.
      REMARQUE : Le pic se produira 5 à 10 minutes après l’injection ; Une baisse à 15 min indique qu’aucune autre image n’est nécessaire. Utilisez des paires de souris de groupes de contrôle et de traitement pour éliminer les biais mineurs dus à des évolutions temporelles différentes.
   4. Remplissez les descriptions pertinentes pour l’expérience. Observez qu’une boîte de dialogue s’affiche automatiquement ; Il comprend des informations, telles que la souche de la souris, le sexe, le point temporel, l’heure de l’injection de la sonde, le groupe, etc. Enregistrez tous les fichiers dans un seul dossier ; Ils auront des balises de temps et toutes les descriptions.

Matériaux