Imagerie de cellules vivantes de la migration nucléaire gliale de Muller pendant la régénération rétinienne du poisson-zèbre

Résumé

Source : Lahne, M., et.al. Culture d’explants rétiniens de poisson-zèbre transgénique adulte pour l’imagerie de cellules vivantes par microscopie multiphotonique. J. Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo démontre l’imagerie de cellules vivantes de la migration nucléaire gliale de Muller dans des explants rétiniens de poisson-zèbre inclus dans de l’agarose suite à des lésions des photorécepteurs induites par la lumière. Le facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-α) libéré par les photorécepteurs endommagés active les cellules gliales de Muller, déclenchant la migration nucléaire à travers les couches nucléaires internes et externes pour la mitose et la génération de progéniteurs neuronaux. Les images capturées révèlent la dynamique de la migration nucléaire et de la différenciation des progéniteurs au cours de la régénération rétinienne.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.

1. Microscopie multiphotonique

REMARQUE : Les expériences réalisées dans ce manuscrit ont été optimisées pour un microscope multiphotonique équipé d’un laser infrarouge (voir le tableau des matériaux), d’un objectif d’immersion dans l’eau longue distance Apo 40X (N.A. 1.15), d’un scanner galvanométrique et d’une chambre environnementale contenant un insert pour quatre boîtes de Pétri de 35 mm. Les images ont été acquises à l’aide d’un détecteur non désançonné (R-NDD).

1. Avant l’imager....

Résultats

Figure 1 : Reconstruction 3D d’empilements z multiphotoniques rétiniens. A) reconstruction 3D d’une série d’images multiphotoniques z-stack de gfap :nGFP- cellules positives dans des cultures rétiniennes entières de poissons-zèbres aprè.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Fluordishes	World precision instruments	FD35-100
Stereomicroscope	Nikon	SMZ-1B	Un type similaire de stéréomicroscope à dissection fonctionnera
Lampes fluorescentes Sylvania OSFP5835HOECO	Bulbtronics	31850
Indice de réfraction liquide	Cargille Lab	1803Y
Le microscope multiphotonique Nikon A1 équipé d’un laser infrarouge MaiTai	Nikon		Equivalent fonctionnera avec
objectif d’immersion dans l’eau longue distance 40x Apo (N.A. 1.15) Chambre environnementale équipée d’un insert pour paraboliques de 35 mm	Système équivalent Okolab		fonctionnera
logiciel d’analyse NIS	Nikon

Le système un