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Visualisation de la migration des cellules de la crête neurale dans un embryon de poisson-zèbre à l’aide de l’imagerie multiphotonique en accéléré

June 17th, 2025

In This Article

Abstract

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Source : Williams, A. L., et al. Imagerie multi-photonique Time Lapse pour visualiser le développement en temps réel : visualisation des cellules de la crête neurale en migration dans les embryons de poisson-zèbre. J. Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo présente un protocole d’imagerie time-lapse multiphotonique permettant de visualiser la migration des cellules de la crête neurale dans un embryon de poisson-zèbre en temps réel avec une haute résolution.

Protocol

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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Configuration du microscope pour l’imagerie en accéléré

1. Détermination des paramètres laser

1. Détermination de la longueur d’onde laser à utiliser. Utilisez une longueur d’onde qui est le double de la longueur d’onde d’excitation du fluorophore d’intérêt (par exemple, une longueur d’onde comprise entre 880 et 940 nm pour la protéine fluorescente verte (GFP).
REMARQUE : ....

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Results

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Graphique 1. Coup monté. A. Chaque composant de l’appareil de montage d’embryons, y compris la chambre de bain ouverte, la plate-forme d’échange rapide et l’adaptateur de scène. B. Montage de la chambre de b.......

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
TC SP5 MP Microscope multiphotoniquesLeica Microsystems CMS GmbH
Mai Tai DeepSee Ti-Sapphire LaserSpectraPhysics
Laser Safety BoxLeica Microsystems CMS GmbH
Leica Application Suite X (LAS X) LogicielLeica Microsystems CMS GmbH
Photoshop CS 6 Version 13.0 x64 LogicielAdobe
iMovie Version 10.1.4 LogicielApple
Open Bath ChamberWarner InstrumentsRC-40HPHigh Profile
Quick Plate-forme d’échangeWarner InstrumentsQE-1Adaptateur de platine 35 mm
Warner InstrumentsSA-20LZ-AL16,5 x 10 cm
Agarose à bas point de fusionISC BioexpressE-3112-25GeneMate Sieve GQA Low MeltAgarose, 25 g
Lamelles en verreFisher Scientific12-545-102Verre de couverture circulaire. Graisse sous vide poussé Fisher de 25 mm de diamètre
Tube Scientific14-635-5Cde 2,0 lb. DOW CORNINGCORPORATION1658832

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Tags

Neural Crest CellsZebrafish EmbryoMulti Photon ImagingTime Lapse ImagingEGFP LabelingZ Stack AcquisitionWater Immersion ObjectiveFluorescence VisualizationEmbryo Media Refill3D Deconvolution

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