Imagerie in vivo du cerveau d’une larve de poisson-zèbre pour visualiser les neurones cérébelleux

Dans cet article

Résumé

Source : Schramm, P. et al. Imagerie in vivo du tissu cérébral entièrement actif chez les larves et les juvéniles de poisson-zèbre éveillés par ablation du crâne et de la peau. J. Vis. Exp. (2021)

Cette vidéo démontre l’imagerie in vivo des neurones cérébelleux chez les larves de poisson-zèbre transgénique, qui expriment des protéines fluorescentes dans les neurones de Purkinje. Le processus consiste à anesthésier les larves, à les immobiliser dans de l’agarose et à retirer soigneusement la peau pigmentée pour améliorer la pénétration de la lumière et l’intensité de la fluorescence. Enfin, les échantillons préparés sont imagés au microscope confocal pour visualiser clairement les neurones marqués.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

Anesthésie des larves et préparations pour l’enrobage
1. Lorsque vous commencez l’expérience pour la journée, transférez les animaux nécessaires avec une pipette Pasteur en plastique dans une boîte de Pétri de 90 mm de diamètre, qui est remplie soit de Danieau (pour les larves qui sont encore conservées dans une boîte de Pétri avec Danieau), soit d’eau de la pisciculture (pour les larves qui ont plus de 7 jours après la....

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Résultats

Figure 1 : Procédure schématique pour la préparation de l’imagerie par étapes de in vivo}. Les instructions de travail pour les différentes étapes se trouvent dans le graphique lui-même. Graphisme co.......