Technique d’aspiration et de traitement percutané des spermatozoïdes de l’épididyme

Résumé

Cette vidéo démontre l’aspiration percutanée de spermatozoïdes épididymaux d’un patient atteint d’azoospermie, une affection caractérisée par l’absence de spermatozoïdes dans le sperme. La procédure consiste à désinfecter la région du scrotum, à aspirer le liquide épididymaire à l’aide d’une seringue avec une solution de culture spécialisée et à traiter l’échantillon collecté pour isoler les spermatozoïdes viables. Les spermatozoïdes préparés sont ensuite prêts à être utilisés dans des procédures avancées de traitement de l’infertilité.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des participants humains ont été effectuées conformément aux directives institutionnelles, nationales et internationales en matière de bien-être humain et ont été examinées par le comité d’examen institutionnel local.

1. Préparation préopératoire

1. Préparation de fournitures chirurgicales
   1. Préparer les fournitures nécessaires à l’intervention chirurgicale, y compris un paquet d’instruments chirurgicaux, deux seringues de 5 ml équipées d’une aiguille de 0,7 mm (0,7 x 32 biseau long à paroi mince (TWLB)), 60 ml de solution désinfectante, deux paires de gants en caoutchouc stériles et un pansement adhésif stérile.
   2. Demandez aux infirmières d’examiner l’emballage des instruments chirurgicaux soumis à la stérilisation à la vapeur à haute pression pour détecter tout dommage ou expiration. Une fois qu’il est confirmé qu’il n’y a aucun problème, placez-le sur la table à instruments et ouvrez la couche externe.
   3. Pour les andrologues : mettez des gants en caoutchouc stériles, puis ouvrez la couche intérieure de l’emballage des instruments chirurgicaux pour vérifier si le ruban indicateur de stérilisation est qualifié ou non, ainsi que pour vous assurer que tous les instruments à l’intérieur sont complets.
   4. Préparez deux seringues de 5 ml munies d’aiguilles de 0,7 mm (0,7 x 32 TWLB) pour l’anesthésie et la chirurgie, puis ouvrez l’ampoule contenant l’injection de lidocaïne.
   5. À l’aide d’une seringue stérile de 5 ml, aspirez l’injection de lidocaïne, éliminant ainsi les bulles d’air de la seringue.
2. Préparation du patient subissant une intervention chirurgicale
   1. Organiser la préparation de la peau pour le patient. Rasez le périnée pubis à l’aide d’un rasoir jetable et lavez le périnée et la peau environnante avec de l’eau savonneuse pour vous assurer qu’il n’y a pas d’excès de pubis ou de taches.
   2. Placez le patient sur la table d’opération en position de lithotomie, retirez le pantalon et fixez le vêtement supérieur au-dessus du nombril pour exposer complètement le périnée et le bas-ventre sous le nombril.
   3. Ajustez l’angle de la lampe sans ombre afin d’éclairer le scrotum du patient.
   4. Utilisez une pince ovale pour saisir une boule de gaze stérile, qui est ensuite complètement immergée dans une solution désinfectante pour lancer le processus de désinfection. Effectuez la désinfection cutanée de la périphérie au scrotum dans l’ordre suivant : bas-ventre, avant et intérieur des cuisses, région périnéale, pénis et scrotum.
   5. Après la désinfection initiale, remplacez la boule de gaze stérile et répétez le processus de désinfection. Après trois cycles de désinfection, le processus de désinfection préopératoire est terminé.
   6. Commencez le processus de pose de serviettes stériles une fois la désinfection terminée. Tout d’abord, placez une serviette carrée stérile sous les fesses du patient, puis étalez une serviette stérile trouée autour de la zone chirurgicale et de ses environs, exposant complètement le scrotum dans la zone du trou.
3. Préparation de la solution de culture G-MOPS-PLUS
   1. Demandez aux techniciens de la salle de culture embryonnaire de transférer environ 2 ml de solution de culture G-MOPS-PLUS dans la boîte de culture à l’aide d’une pipette Pasteur stérile. Fermez correctement le couvercle, puis remettez-le à l’infirmière dans la salle d’opération par la fenêtre de transfert.
   2. Placez le bol de culture sur la serviette stérile de la table à instruments et ouvrez le couvercle.
   3. À l’aide d’une autre seringue de 5 ml, aspirer environ 0,2 mL de solution de culture G-MOPS-PLUS, puis retirer les bulles d’air pour une utilisation future.

2. Anesthésie et chirurgie

1. Pour les andrologues : tenez la seringue remplie d’injection de lidocaïne dans la main droite tout en fixant le cordon spermatique du patient avec la main gauche. Percez par voie sous-cutanée et injectez une petite quantité de lidocaïne pour former une papule. Ensuite, ponctionner sous-cutané et approfondir dans le tissu du cordon spermatique, en commençant à injecter environ 0,5 ml de lidocaïne après avoir confirmé qu’il n’y a pas de retour sanguin. Pour obtenir un meilleur effet de l’anesthésie par bloc du cordon spermatique, changez la direction de l’aiguille d’injection 2 à 3 fois au même point de ponction et répétez l’opération d’injection de lidocaïne dans le cordon spermatique.
2. Tenez le scrotum du patient avec la main gauche, en fixant l’épididyme qui nécessite une ponction. En palpant, confirmez l’emplacement de l’épididyme où la ponction chirurgicale est nécessaire à l’aide de la main droite. Ensuite, tenez la seringue contenant la lidocaïne mentionnée ci-dessus et injectez-la sous la peau au site de ponction pour obtenir une anesthésie d’infiltration locale.
3. Tenez le scrotum du patient avec la main gauche, en fixant l’épididyme qui nécessite une ponction. Ensuite, tenez la seringue de 5 mL contenant la solution de culture G-MOPS-PLUS (0,2 mL) dans la main droite et percez perpendiculairement à la peau, en pénétrant dans le tissu épididymaire. Maintenez une pression négative dans la seringue et percez de manière répétitive le tissu épididymaire afin que le liquide épididymaire pénètre par l’aiguille sous l’effet d’une pression négative.
4. Continuez à maintenir une pression négative et retirez lentement l’aiguille de ponction. Injectez le liquide épididymaire extrait dans la boîte de culture. Une fois l’injection terminée, aspirez la solution de culture G-MOPS-PLUS à proximité pour rincer la seringue afin de maximiser la quantité de liquide épididymaire collectée injectée dans la boîte de culture.

3. Traitement des échantillons chirurgicaux

1. Recherche et observation de spermatozoïdes épididymaires
   1. Transférer la boîte de culture contenant le liquide de culture G-MOPS-PLUS et le liquide épididymaire au technicien de laboratoire embryonnaire par la fenêtre de transfert.
   2. Les techniciens de la salle de culture embryonnaire prennent en charge la boîte de culture et la placent sur la platine d’un microscope optique inversé, en la fixant. Allumez l’interrupteur d’alimentation du microscope et tournez le bouton de réglage de la lumière jusqu’à une intensité lumineuse appropriée.
   3. Faites pivoter le convertisseur du microscope à optique inversée, sélectionnez l’objectif 10x, tournez tour à tour les spirales de mise au point grossière et fine pour ajuster la distance focale. Observez la situation de focalisation et recherchez des spermatozoïdes épididymaires au microscope.
   4. Continuez à faire pivoter le convertisseur du microscope inversé vers l’objectif 40x, tournez la spirale de mise au point fine pour ajuster la distance focale et observez les spermatozoïdes épididymaires champ par champ. Évaluer le nombre et la qualité des spermatozoïdes de l’épididyme. On peut voir que les spermatozoïdes épididymaires normaux ont mûri et ont acquis la capacité de se déplacer.
2. Traitement des spermatozoïdes épididymaires
   1. Après avoir observé suffisamment de spermatozoïdes épididymaires actifs, transférez le liquide dans la boîte de culture dans un tube à centrifuger de 15 ml à l’aide d’une pipette Pasteur stérile.
   2. Placez le tube à centrifuger ci-dessus sur le plateau d’équilibrage et utilisez un tube à centrifuger de la même spécification contenant de l’eau stérile pour niveler.
   3. Ouvrez la porte de la centrifugeuse, placez les tubes de centrifugation dans la fente de la carte de manière symétrique, puis fermez la porte de la centrifugeuse. Réglez la force centrifuge à 500 x g et le temps de centrifugation à 5 min via le panneau de configuration. Appuyez sur le bouton START du panneau de commande pour lancer le processus de centrifugation.
   4. Une fois le processus de centrifugation terminé, ouvrez la porte de la centrifugeuse et retirez le tube de centrifugation contenant le liquide épididymaire. Dévissez le couvercle, aspirez doucement le surnageant à l’aide d’une pipette Pasteur stérile et jetez le surnageant tiré.
   5. À l’aide d’une pipette Pasteur stérile, transférez environ 2 ml de solution de culture G-IVF-PLUS dans le tube à centrifuger. Ensuite, pipetez doucement la solution dans le tube à centrifuger pour la remettre en suspension complètement.
   6. Répétez les processus d’équilibrage, de centrifugation et d’élimination de la couche supérieure de liquide.
   7. Selon les besoins de l’injection intracytoplasmique de spermatozoïdes (ICSI), transférez environ 0,5 ml de solution de culture G-IVF-PLUS dans le tube de centrifugation à l’aide d’une pipette Pasteur stérile, et soufflez doucement les spermatozoïdes épididymaires au fond du tube de centrifugation pour le rendre complètement suspendu.
   8. Utilisez les spermatozoïdes épididymaires complètement suspendus directement pour le processus ICSI.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Centrifugeuse	Origio MAXI	G123511110440	RPM max. : 4000 ; RCF max. : 2826 x g
Tube à centrifuger	Falcon	352095	15 mL
Support de tube à essai combiné	Shenzhen Zhicheng Long Technology Co., LTD	None
Plat de culture	Falcon	353001	35 mm x 10 mm
solution désinfectante	Shanghai Likang Disinfection high-tech Co., LTD	20230801S	60 mL
G-IVF PLUS	Vitrolife Sweden AB	511574	solution de culture pour le traitement des fluides épididymaires
G-MOPS PLUS	Vitrolife Sweden AB	511712	solution de culture pour opération de ponction
Pipettes Pasteur embryonnaires de haute sécurité	Darwin	D2208003	230 mm, Poli au feu
table à instruments		DZ202012010
Microscope optique inversé	OLYMPUS	<
injection de chlorhydrate de lidocaïne		H31021072	5 mL : 0.1 g
médical balance	Shanghai Guangzheng Medical Instrument Co., LTD	201609-4854	JYT-2
Masques chirurgicaux médicaux	Guangzhou City Panyu district Haozheng health materials factory	161220328	17.5×9.5 cm(taille de dépliage 17.5×17 cm)
Table de commande motorisée	Shandong Mingtai Medical Equipment Co., LTD	YZB0089-2011	operation table
Self-Adhesive Wound Dressing	Guangzhou Ya Tian Biological Technology Co., LTD	20142140348	6 cm x 7 cm(3 cm x 4 cm)
Seringues hypodermiques stériles à usage unique	Shandong Weigao Group Medical polymer Products Co., LTD	20230921	5 mL, équipé d’un 0.7mm (0.7 x 32TWLB)
Gant chirurgical en latex stérile sans poudre	Beijing Ruijing Latex Products Co., LTD	2023030322	71/2, 61/2
Paquet d’instruments chirurgicaux	Département d’approvisionnement du troisième hôpital affilié de l’Université Sun Yat-sen	10228376	stérilisation en autoclave
Lampe chirurgicale	Shanghai Jishun Medical Device Manufacturing Co., LTD	JSL2009-160D
Table de nettoyage à flux vertical	Suzhou Wanda Purification Technology Co., LTD	DS-CZ-1311006	SH-CJ-2FD-1500

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