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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Micro-injection
- Préparez la chirurgie stérile en essuyant soigneusement l’instrument stéréotaxique avec de l’éthanol à 70 %. Immergez l’instrument chirurgical dans de l’éthanol à 70 % pour le stériliser.
- Frottez la tête du chiot avec de l’éthanol à 70 %. Localisez le lambda de repère sur le crâne et marquez-le avec un marqueur. Dirigez la pointe de l’aiguille vers le lambda et réglez les coordonnées antéro-postérieure (AP) et médiale-latérale (ML) sur zéro.
- Déplacez le bras d’injection vers le site cible en fonction des coordonnées X et Y du site cible. Pour le striatum des petits du jour postnatal (P) 2, les coordonnées sont : AP, +2,4 mm en avant du lambda ; ML, ±1,0 mm latéralement à partir de la ligne médiane ; dorsale-ventrale (DV), à -1,7 mm du crâne. Marquez la position du colorant vert rapide dans le tube PE10 avec un stylo.
- Abaissez lentement l’aiguille d’injection 30G pour qu’elle pénètre à travers la peau et le crâne, puis remontez la pointe de l’aiguille jusqu’à ce qu’elle s’arrête à la surface du crâne. Réglez la coordonnée DV sur zéro.
- Abaissez lentement l’aiguille d’injection 30G jusqu’à ce qu’elle atteigne la coordonnée DV du site cible. Attendez 1 min pour permettre au parenchyme de reprendre sa forme normale. Ensuite, exécutez le programme de micro-injection (100 nL/min).
- Assurez-vous que la marque du colorant vert rapide se déplace dans le tube PE pour vous assurer que le liquide viral est injecté dans le cerveau.
- Attendez 1 minute après la fin de la microinjection, puis remontez lentement et progressivement l’aiguille jusqu’à la hauteur de la profondeur DV en 30 s. Après 30 s, retirez lentement l’aiguille de la tête du chiot.
2. Récupération post-chirurgicale du chiot
- Réchauffez le chiot pendant 20 min dans un incubateur à 33 °C. Vérifiez le rétablissement du chiot après une anesthésie d’hypothermie toutes les 5 minutes jusqu’à ce que le chiot ait repris suffisamment conscience pour maintenir sa décubitus sternal.
- Remettez le chiot à la mère une fois qu’il est complètement rétabli.