FACTEUR DE CROISSANCE NERVEUSE ENCAPSULANT DANS DES NANOPARTICULES IMITANT LES LIPOPROTÉINES DE HAUTE DENSITÉ

Résumé

Source : Zhu, J., et. al., Préparation et caractérisation de nouvelles nanoparticules imitant le HDL pour l’encapsulation du facteur de croissance nerveuse. J. Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo démontre l’assemblage par étapes de nanoparticules chargées de NGF imitant le HDL à l’aide de l’encapsulation assistée par la protamine et de l’auto-assemblage à base de lipides pour des applications potentielles d’administration neurotrophique.

Protocole

1. Préparation de nanoparticules NGF imitant le HDL

1. Dissoudre les excipients, la phosphatidylcholine (PC), la sphingomyéline (SM), la phosphatidylsérine (PS), l’oléate de cholestryle (CO) et le succinate de polyéthylène glycol de D-α-tocophérol (TPGS), dans de l’éthanol pour préparer des solutions mères à 1 mg/mL.
   REMARQUE : Les solutions mères ont été aliquotes et stockées à -20 °C. L’oléate de cholestéryle était stocké dans des bouteilles sombres. Les solutions mères PC, SM, PS et CO sont restées stables jusqu’à 6, 3, 12 et 12 mois, respectivement, à -20 °C. La solution TPGS est restée stable pendant au moins 12 mois à -20 °C.
2. Mélangez 10 μL de NGF (1 mg/mL dans l’eau) avec 10 μL de protamine USP (1 mg/mL dans l’eau) dans un tube de microcentrifugation de 1,5 mL et laissez reposer pendant 10 min à température ambiante pour former le complexe.
   REMARQUE : Les solutions mères de NGF et de protamine ont été aliquotes et stockées à -20 °C. La congélation et la décongélation répétées ne sont pas recommandées pour le stock de NGF.
3. Ajoutez 59 μL de PC, 11 μL de SM, 4 μL de PS, 15 μL de CO et 45 μL de TPGS dans un flacon en verre. Mélangez et évaporez l’éthanol sous un léger jet d’azote pendant environ 5 min ; Tous les excipients doivent former une fine pellicule huileuse au fond du flacon en verre.
4. Ajouter 1 mL d’eau ultrapure (type 1) dans le flacon et homogénéiser à 9 500 tr/min (8 600 x g) pendant 5 min à température ambiante pour former les nanoparticules prototypes (NP).
5. Ajouter le complexe préparé à l’étape 1.2 aux NP prototypes et incuber à 37 °C pendant 30 min en agitant à l’aide d’une petite barre d’agitation dans le flacon en verre.
6. Refroidissez les NP en les remuant à température ambiante pendant encore 30 min. Une fois refroidi, ajoutez 106 μL d’Apo A-I (1,49 mg/mL) et remuez à température ambiante pendant la nuit pour former les NP finaux imitant le HDL NGF.

Matériaux