Injection virale stéréotaxique pour l’édition de gènes neuronaux ciblés dans le cerveau de souris

Résumé

Source : Fricano-Kugler, C. J., et al. Conception, emballage et administration de CRISPR retro et de lentivirus à titre élevé par injection stéréotaxique. J. Vis. Exp. (2016)

Cette vidéo démontre l’injection virale stéréotaxique pour une édition précise des gènes neuronaux dans le cerveau de la souris. Le protocole garantit une livraison précise du virus au gyrus denté, permettant le marquage fluorescent et l’inactivation de gènes médiée par CRISPR pour étudier les circuits neuronaux, la fonction des gènes et les mécanismes de la maladie in vivo.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Injection stéréotaxique

1. Confirmez que la ventilation de la salle d’opération est ouverte pour assurer une bonne circulation de l’air. Préparez la souris à la chirurgie en l’anesthésant avec de l’isoflurane à 4 % dans une chambre d’induction. Après l’anesthésie, rasez la tête pour préparer le site d’injection.
   1. Place la souris dans l’instrument stéréotaxique en utilisant une pince à épiler pour déplacer la langue vers le bas et sur le côté. Insérez la barre d’....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Réactifs
Vet-Seringue vétérinaire utilisation vétérinaire T.B. Seringue uniquement 1cc luer slip T.B. 100/bx	Med-Vet International	1CCVLS
Isoflurane
Lames de scalpel en acier inoxydable, #10, pqt de 100	Med-Vet International	JOR580S
Pommade pour larmes artificielles	Med-Vet International	RXPARALUBE-O
PVP PrepSolution	Med-Vet International	HPIV108208H
Saline normale	Med-Vet International	DYND500MLSH
Applicateurs à embout en coton	Med-Vet International	CTA6
Pommade antibiotique triple	Med-Vet International	RXTRIP-OI15
MONOJECT® Aiguilles Soft Pack 25g x 5/8"	Med-Vet International	25058
6-0 sutures en soie	Med-Vet International	MV-711

de chirurgie stéréotaxique