Imagerie des transitoires calciques rapides dans les terminaisons nerveuses de souris à l’aide de la microscopie confocale

Résumé

Source : Zhilyakov, N. V. et. al., Enregistrement des transitoires calciques dans la jonction neuromusculaire de souris à haute résolution temporelle à l’aide de la microscopie confocale. J. Vis. Exp. (2021)

Cette vidéo démontre la technique d’imagerie permettant d’enregistrer les transitoires calciques rapides au niveau des terminaisons nerveuses à l’aide de la microscopie confocale. En stimulant le nerf et en capturant les changements de fluorescence des colorants liant le calcium, il visualise l’afflux dynamique de calcium et sa clairance à la terminaison nerveuse, offrant ainsi des informations précises sur l’activité synaptique et la signalisation neuromusculaire.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.

Des expériences ont été réalisées sur des préparations nerveuses-musculaires isolées de releveur de l’auris longus (m. LAL) chez les souris BALB/C (20-23 g, âgées de 2-3 mois).

1. Préparation des solutions de Ringer et de limage

1. Préparez la solution de Ringer pour le muscle de mammifère en mélangeant les ingrédients suivants : chlorure de sodium, NaCl (137 mM), chlorure de potassium, KCl (5 mM), chlorure de calcium, CaCl₂ (2 mM), MgCl₂ (1 mM), NaH₂PO₄ (1 mM), NaHCO

Résultats

Figure 1 : Le schéma de la configuration expérimentale. 1. Microscope confocal à balayage laser (LSCM). 2. Module de synchronisation de LSCM (boîte de déclenchement). 3. Stimulateur. 4. Unité d’isolement. 5. L’échantillon biologique. 6. Électrod.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Capillary Glass	Clark Electromedical instruments, UK	GC150-10
Système de microscope confocal et multiphotonique Leica TCS SP5 MP	Leica Microsystems , Heidelberg, Germany
Flaming/Brown Extracteur de micropipette P 97	Sutter Instrument, USA	P-97
Régulateur de débit	KD Medical GmbH Hospital Products, Allemagne	KD REG	Kit de perfusion jetable avec régulateur de débit
HEPES	Sigma-Aldrich, USA	H0887	100mL
Système d’éclairage Leica CLS 150X	Leica Microsystems, Allemagne
Support magnétique avec aspiration tube	BIOSCIENCE TOOLS, USA	MTH-S
Microspin FV 2400	Biosan, Lettonie	BS-010201-AAA
Minutien Pins	Outils pour les sciences fines, Canada	26002-20
Multi-spin MSC 3000	Biosan, Lettonie	BS-010205-AAN
Oregon Green 488 BAPTA-1 Sel pentapotassique	Sondes moléculaires, USA	O6806	500 μg
Pipette	Biohit, Russie	720210	0.5-10 μL
Pointe de pipette	Biohit, Russie	781349	10 μL
Pâte à modeler	Producteur
Aiguilles hypodermiques à usage unique	Bbraun	100 Sterican	0.4×40 mm
Tableur	Microsoft, États-Unis	Microsoft Office Excel
Stéréomicroscope, Leica M80	Leica Microsystems , Allemagne
Électrode d’aspiration			http://research-journal.org/biology/prostoj-vsasyvayushhij-elektrod-dlya-elektricheskoj-stimulyacii-biologicheskix-obektov/
Sylgard 184 élastomère	Dow Corning, USA
Seringue	producteur		0,5 mL
Seringue	producteur		60 mL

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