Visualisation de thrombus cérébraux de souris à l’aide de l’imagerie par fluorescence dans le proche infrarouge

Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.

1. Imagerie ex vivo par fluorescence proche infrarouge (NIRF) du tissu cérébral

1. Après la décapitation, retirez le cuir chevelu et coupez le crâne avec des ciseaux du foramen magnum vers la suture sagittale. Retirez la voûte crânienne en élevant soigneusement les bords du crâne incisé à l’aide de ciseaux tout en évitant de blesser le cerveau sous-jacent, mettant ainsi à nu les hémisphères.
2. Coupez les nerfs optiques de la base du cerveau aussi près que possible de la surface du cerveau, car ils pourraient se chevaucher avec le cercle des artères de Willis (COW) qui devraient être visualisées sur l’imagerie fluorescente dans le proche infrarouge (NIRF). Ensuite, pour visualiser la forme en Y de l’artère cérébrale moyenne (ACM) / de l’artère cérébrale antérieure (ACA) / de l’artère carotide interne distale (ICA) pour l’imagerie du thrombus NIRF, découpez les ICA distaux aussi loin que possible de la surface du cerveau après avoir comprimé doucement la base cérébelleuse pour exposer les points de coupe (Figure 1A).
3. Effectuer une imagerie NIRF (excitation/émission, 675 / 690 nm ; exposition de 1 seconde) du tissu cérébral retiré avec sa base pointant vers le haut (Figure 1B, C), ce qui permet de visualiser les thromboemboles marqués par fluorescence dans les artères de la vache (Figure 1D). Ensuite, effectuez une imagerie supplémentaire avec le sommet du cerveau pointant vers le haut, ce qui permet de visualiser les thromboembolis corticaux. Évitez d’assécher le cerveau en mettant quelques gouttes de solution saline sur le tissu.

Figure 1 : Vue d’ensemble de l’imagerie par fluorescence proche infrarouge (NIRF) des thromboembolis cérébraux. (A et B) Un tissu cérébral représentatif a été retiré d’une souris ayant subi un AVC thromboembolique. Prenez des précautions pour ne pas perdre de thromboembolie (flèche rouge) dans la zone de bifurcation de l’artère cérébrale moyenne (ACM) – artère cérébrale antérieure (ACA) de l’artère carotide interne distale (ICA, flèches bleues) lors de l’ablation du cerveau. (C et D) Ex vivo Imagerie du thrombus NIRF. Le tissu cérébral est placé à l’intérieur de la chambre étanche à la lumière d’un imageur NIRF (C) pour la visualisation du thrombus (flèche rouge en D) pré-marqué avec le marqueur fluorescent Cyanine 5.5 (Cy5.5) C15 avant l’occlusion embolique de la zone de bifurcation MCA-ACA.