Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Injections intramusculaires au niveau des plaques d’extrémité du moteur
- Tirez les micropipettes en verre à l’aide d’un extracteur de micropipettes (l’utilisation de micropipettes graduées avec pistons est recommandée). À l’aide d’un microscope à dissection, cassez les pointes des micropipettes à l’aide d’une pince de sorte que le diamètre interne de la lumière de la micropipette soit d’environ 0,5 mm.
- Assurez-vous que tous les instruments chirurgicaux utilisés sont fraîchement autoclavés et que la zone chirurgicale est stérile.
- Remplissez les micropipettes avec du Fluoro-Gold (5 % dans de l’eau distillée).
- Induire une anesthésie chez l’animal à l’aide d’Isoflurane (4 % en O2) dans une chambre d’induction. Vérifiez le réflexe de redressement et assurez-vous de son absence avant de le retirer de la chambre d’induction. Fixez un cône nasal sur le museau du rat et délivrez de l’isoflurane (2 % dansO2) pour le maintien de l’anesthésie. Pincez les orteils de l’animal et touchez doucement l’œil de l’animal pour vous assurer que le retrait de la pédale et les réflexes cornéens sont absents.
REMARQUE : Un mélange de kétamine et de xylazine peut également être utilisé (80 et 10 mg/kg, respectivement, administrés par voie intrapéritonéale). La kétamine est une drogue de l’annexe 8 (« contrôlée »), et les protocoles nécessaires associés à l’achat, à l’utilisation, au stockage et à l’élimination de la drogue devront être respectés. - Appliquez un lubrifiant pour les yeux pour éviter le dessèchement des yeux au cours de la procédure.
- Rasez le membre ciblé et utilisez de la gaze pour essuyer la zone rasée avec trois gommages alternés de chlorhexidine et d’alcool à 70 %. Transférez l’animal dans la zone chirurgicale.
- Placez l’animal sur un sous-coussin propre et positionnez-le de manière appropriée pour assurer un bon accès au(x) muscle(s) ciblé(s).
- Utilisez une paire de pinces avec des mâchoires pour soulever la peau sur le muscle ciblé loin de la musculature sous-jacente et faites une incision dans la peau avec des ciseaux chirurgicaux. Assurez-vous que l’incision est suffisamment large pour exposer complètement le ou les muscles d’intérêt. Assurez-vous qu’il y a un minimum de perturbation du fascia.
- Utilisez les photographies de la plaque d’extrémité motrice (MEP) pour transposer mentalement l’emplacement et la forme de la région MEP sur le(s) muscle(s).
REMARQUE : Un marqueur en feutre fin pourrait aider à reproduire la région MEP de la photo sur le(s) muscle(s) d’intérêt. - Effectuez plusieurs injections sur toute la longueur de la région MEP (pour Fluoro-Gold, 3 à 4 injections de 1 à 2 μl chacune devraient suffire). Essuyez doucement le(s) muscle(s) pour éliminer toute infiltration.
- Rapprochez les deux extrémités de la peau incisée à l’aide d’une pince émoussée et fermez la plaie à l’aide de clips chirurgicaux. Infiltrer 0,1 ml de bupivacaïne (0,5 % dans l’eau) (ou d’autres anesthésiques locaux) sur toute la durée de la plaie.
- Éteignez l’appareil d’anesthésie et surveillez l’animal jusqu’à ce qu’il se soit complètement remis de l’anesthésie.
- Attendre 14 jours entre l’administration des injections intramusculaires et la perfusion des animaux.
