Caractérisation de cellules souches mésenchymateuses génétiquement modifiées pour des applications neurothérapeutiques

Abstract

Source : Sharma, A. D., et.al. Caractérisation à haut débit de cellules souches adultes conçues pour l’administration de facteurs thérapeutiques pour des stratégies neuroprotectrices. J. Vis. Exp. (2015)

Cette vidéo démontre le processus de caractérisation des cellules souches mésenchymateuses transgéniques modifiées pour exprimer des facteurs neurotrophiques thérapeutiques. Il décrit les étapes de la fixation, de la perméabilisation et de la coloration des cellules avec des anticorps primaires et secondaires ciblant un marqueur de prolifération cellulaire, suivies d’une analyse à l’aide d’un système de criblage à haut contenu pour capturer les signaux fluorescents dans les noyaux. L’expression accrue des marqueurs de prolifération confirme l’aptitude des cellules transgéniques à des applications neurothérapeutiques.

Protocol

Toutes les procédures impliquant des échantillons d’animaux ont été examinées et approuvées par le comité d’éthique animale approprié.

1. Ki67 Essai de prolifération cellulaire

1. Ki67 Essai de prolifération cellulaire (immunocytochimie)
   1. Rincez les cultures cellulaires avec un tampon de phosphate 0,1 M (PO₄) pendant une minute deux fois. Fixez la culture avec du paraformaldéhyde à 4 % (PFA) pendant 20 min à température ambiante. Retirez le PFA et rincez les puits avec du PBS pendant sept minutes trois fois.
   2. Après le rinçage final, ajoutez 100 μl de solution bloquante (tampon phosphate salin, sérum ....

Materials