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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Note de préparation
de l’animal: Les animaux qui doivent subir des blessures légères nécessitent une adaptation à l’obscurité la nuit précédant l’ischémie à distance. Les animaux subissant des dommages légers nécessitent un élevage à l’obscurité (12 heures de lumière : cycle d’obscurité, 5 lux)
- Effectuez une ischémie à distance chez les rongeurs éveillés ou anesthésiés. Assurez-vous que les animaux ont un tonus musculaire sain. Assurez-vous de le faire en pinçant le membre postérieur supérieur pour confirmer qu’il y a suffisamment de muscle présent. La protection induite par le RIP contre les lésions légères a été testée chez des rats sédentaires jusqu’à l’âge de 6 mois.
- Préparation anesthésiée pour le préconditionnement ischémique à distance (RIP)
- Injectez à des rats une injection intrapéritonéale de 60 mg/kg de kétamine et de 5 mg/kg de xylazine. Vérifiez la profondeur de l’anesthésie en étendant la jambe et en pinçant la peau sous le pied. L’animal n’a pas de réflexe s’il est profondément anesthésié. Appliquez des larmes artificielles pour éviter la sécheresse de la cornée sous anesthésie.
- Placez les rats sur un coussin chauffant ou sur un tube de chauffe-eau pour maintenir une température corporelle constante de 37,5 °C. Placez le rat en position couchée avec les coussinets des membres inférieurs vers le haut. Le membre droit ou le membre gauche peut subir une ischémie à distance.
2. Application de la sonde de température cutanée
- Étendez la patte du rat qui doit subir une ischémie et placez la sonde cutanée sur le coussinet plantaire. Positionnez la sonde cutanée de manière à maximiser le contact entre la sonde de température et la peau. Poussez fermement la sonde dans le repose-pieds et fixez-la avec du ruban adhésif.
- Vérifiez l’emplacement de la sonde cutanée en suivant la température sur le logiciel d’enregistrement de la température. Assurez-vous que la température de la peau est comprise entre 30 et 34 °C et qu’elle reste stable. Suivez la température de la peau pendant 1 à 2 minutes. Ajustez la sonde cutanée si la température est instable ou inférieure à 30 °C.
3. Ischémie à distance
- Dégonflez le brassard et assurez-vous que la soupape de pression d’air est fermée. Étendez la jambe et encerclez lâchement le brassard sur le membre postérieur supérieur. Utilisez l’index et le pouce pour étendre la jambe et les doigts inférieurs afin de maintenir le poignet desserré en position.
- Augmentez la pression du brassard de l’animal anesthésié à 160 mmHg et, chez les animaux éveillés, augmentez la pression du brassard à 180 mmHg.
Remarque : La pression artérielle anesthésiée des rats varie de 120 à 140 mmHg et augmente à 160 mmHg lorsqu’ils sont conscients. Démarrez la minuterie et l’enregistrement de la température du pied une fois que la pression correcte est atteinte.
Remarque : La température du pied doit baisser de 2 °C après 5 min de pression constante. - Maintenez la position du brassard au-dessus du « genou » de l’animal tout au long de l’ischémie. La pression du brassard commencera à diminuer après quelques minutes ou si le membre du rat bouge.
- Pompez à plusieurs reprises la poire de gonflage par courtes rafales pour maintenir la pression souhaitée du ballonnet De courtes rafales répétitives de pompage
à - distance L’ischémie à distance peut être délivrée en continu pendant entre 5 et 15 minutes. Le protocole de reperfusion d’ischémie comprend 2 périodes d’ischémie de 5 minutes avec une reperfusion intermédiaire de 5 minutes.
- Dégonflez la pression du brassard en desserrant la soupape de pression d’air. Vérifiez l’évolution de la température au cours du protocole d’ischémie. Relâchez le brassard.
- Poursuivez l’expérimentation des blessures. Les animaux sous anesthésie devront être placés sur un coussin chauffant. Continuez à surveiller les animaux jusqu’à ce qu’ils soient ambulatoires. Les animaux ne peuvent pas être renvoyés dans leur logement avant de marcher.