Conduits ensemencés de cellules Schwann pour la régénération axonale après une lésion de la moelle épinière

Résumé

Source : Lee, Y., et.al. Transplantation de cellules de Schwann à l’intérieur de conduits en PVDF-TrFE pour relier les moignons de moelle épinière de rat transectés afin de favoriser la régénération axonale à travers l’espace. J. Vis. Exp. (2017)

Cette vidéo démontre l’utilisation d’un conduit polymère piézoélectrique ensemencé de cellules de Schwann pour favoriser la régénération axonale dans une moelle épinière de rat transectée. Le conduit fournit un guidage structurel, tandis que ses propriétés bioélectriques stimulent la croissance des neurites. Les cellules de Schwann dans le conduit sécrètent des facteurs neurotrophiques, favorisant le pontage axonal entre les moignons rostral et caudal.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Transection à T8

1. Place l’écarteur autour de T7 à T9. Une fois que toutes les lames sont retirées, assurez-vous que les espaces entre les apophyses transversales sont visibles, en particulier à T8. Examinez également les os sur toute la longueur des deux côtés entre T7 et T9 pour vous assurer qu’il n’y a pas de fragments d’os qui dépassent vers l’extérieur.
   REMARQUE : Cet espace à T8 est important pour effectuer la transection complète. Les vertèbres sur toute la longueur doivent être retirées pour faciliter l’insertion du conduit.
2. Coupez les racines dorsale et ventrale au-dessus et en dessous de T8 à l’aide de ciseaux à ressort coudés. Ajoutez une solution saline à la moelle épinière et attendez que le sang coagule.
   REMARQUE : Cette étape est importante pour une bonne insertion du conduit.
3. Placez les ciseaux à ressort coudés au-dessus de la moelle épinière dans les espaces entre les apophyses transversales en T8 et faites une coupe pour sectionner complètement la moelle épinière. Placez un petit morceau de mousse compressée dans l’espace de 2 à 2,5 mm obtenu et ajoutez immédiatement une solution saline à la zone.

2. Insertion de conduit

1. En attendant que les moignons de cordon sectionnés atteignent l’hémostase, retirez un conduit de 1x PBS. Coupez les triangles d’absorption en longs morceaux minces et placez-les dans le conduit pour éliminer l’excès de PBS. Vérifiez que les fenêtres prédécoupées sont ouvertes.
2. Éliminez la solution saline et le sang à l’aide de longs morceaux minces de triangles d’absorption. Soulevez les deux moignons de la moelle épinière à l’aide d’une microspatule pour assurer une bonne séparation. Soulevez doucement le moignon rostral avec la microspatule et glissez le conduit sur le moignon avec les fenêtres face à soi. Assurez-vous que toute la souche est insérée et qu’il n’y a pas de saignement excessif dans le conduit.
3. Soulevez doucement le moignon caudal et glissez l’autre extrémité du conduit sur le moignon. Assurez-vous que toute la souche est insérée et que les fenêtres sont sur la surface dorsale (Figure 1A).

3. Préparation et injection de la matrice injectable Schwann Cell (SC) En

1. attendant que le cordon sectionné atteigne l’hémostase, retirez le milieu au-dessus de la pastille GFP-SC. Remettre en suspension les GFP-SC dans 10 μl de DMEM/F12 froid. Ajouter 10 μl de gel injectable froid à la suspension cellulaire et bien mélanger par pipetage répété. Conservez le mélange de matrice GFP-SC/DMEM/F12/injectable sur de la glace jusqu’à ce que l’insertion du conduit soit terminée.
2. Après s’être assuré que les fenêtres de la surface dorsale sont ouvertes (figure 1A), injecter 20 μl du mélange de matrice GFP-SC/DMEM/F12/injectable dans le conduit à travers l’une des fenêtres prédécoupées à l’aide d’une pointe de chargement par western blot et d’une micropipette. Si le mélange de matrice SC/DMEM/F12/injectable doit dépasser le conduit, enlever l’excédent avec des triangles d’absorption. Fermer les fenêtres après l’injection ; La suture n’est pas nécessaire (Figure 1B).

Résultats

Figure 1 : Fermeture de la fenêtre après l’injection SC/DMEM/F12/matrix. Les fenêtres s’ouvrent en repliant chaque rabat après avoir placé le conduit entre les moignons rostral et caudal (A). Les fenêtres sont fermées après ...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Dulbecco’s modified Eagle’s medium : mélange de nutriments F-12	ThermoFisher Scientific	11039-021	"DMEM/F12 » dans le protocole.
Rat Fischer femelle (160-180g)	Ciseaux Envigo
Vannas, droit	FST	15018-10
Micro Spatule	FST	10089-11	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Ciseaux incurvés à extrémité émoussée	FST	14017-18	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Pince émoussée	FST	11006-12	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Rongeur	FST	16121-14	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Ciseaux à ressort coudés	FST	15006-09	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Triangles d’absorption	FST	18105-03	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Gelfoam	Henry Schein	9083300	"Mousse compressée » dans le protocole.
#10 lames	Sklar	06-3010	Peut être n’importe quelle marque de choix.
Matrigel	Corning	354234	"Matrice injectable » dans le protocole.