Formulation d’un système de transport d’exosomes chargé de dopamine

Résumé

Source : Yavuz, B., et al. Formulation et caractérisation d’un système de transport de dopamine basé sur des exosomes. J. Vis. Exp. (2022)

Cette vidéo démontre la formulation d’exosomes chargés en dopamine, en se concentrant sur la perméabilisation membranaire induite par la saponine pour améliorer l’encapsulation de la dopamine dans les exosomes.

Protocole

1. Charge de dopamine dans les exosomes

REMARQUE : Une fois la caractérisation des exosomes des cellules souches mésenchymateuses de Wharton’s Jelly (WJ-MSCs) terminée, des exosomes chargés en dopamine ont été obtenus en tant que système d’administration de médicaments. Le chargement du médicament dans les exosomes est effectué à l’aide de la méthode d’incubation.

1. Ajouter 3 ml de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) à la suspension d’exosomes. Stériliser la suspension diluée par filtration à l’aide de filtres de 0,22 μm. Transférez 500 μL de la suspension d’exosomes stérilisés dans un autre tube.
2. Préparez une solution de dopamine (0,5 mg/mL) avec de l’eau distillée. Ajoutez 500 μL de solution de dopamine dans les tubes contenant les exosomes.
3. Ajoutez de la saponine à la suspension à l’étape 1.2. Incuber la suspension d’exosome-dopamine préparée pendant 24 h à 37 °C. REMARQUE : La concentration de saponine ne doit pas dépasser 0,002 % de la solution totale.
4. Ultracentrifuger la suspension à 90 000 × g pendant 70 min pour éliminer la dopamine libre et la saponine du milieu. Conservez les exosomes isolés à -20 °C jusqu’à ce qu’ils soient utilisés pour une analyse plus approfondie. note: Ajouter 0,02 % d’acide ascorbique pour la stabilité de la solution de dopamine préparée.

Matériaux