Évaluation des effets neuroprotecteurs d’un composé testé dans un modèle murin d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne

Résumé

Source : Lee, S. E., et al. Évaluation des effets neuroprotecteurs de l’extrait de Glycyrrhizae Radix et Rhizoma à l’aide d’un modèle murin d’occlusion transitoire de l’artère cérébrale moyenne. J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo montre la procédure d’évaluation de l’effet neuroprotecteur d’un composé testé dans un modèle murin d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne. Le composé pénètre dans le cerveau, prévient la mort neuronale et réduit le volume de l’infarctus, confirmant son effet neuroprotecteur par rapport à une souris non traitée.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Modèle murin d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne (MCAO)

1. Utilisez des souris mâles C57BL/6 âgées de 6 semaines et pesant 22-25 g. Fournissez à tous les animaux un accès gratuit à de la nourriture et de l’eau standard, et hébergez-les dans un environnement à température contrôlée (22 ±1°C) et un cycle lumière/obscurité de 12 heures.
   1. Divisez les souris en groupes de six souris chacun, qui doivent être composés de groupes de traitement normaux, témoins et Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GRex) opérés par placebo.
   2. Effectuez une chirurgie MCAO sur les groupes de contrôle et de traitement GRex à l’aide d’un stéréomicroscope.
2. Induire une anesthésie par inhalation chez les souris en utilisant 2 % d’isoflurane dans 70 % de protoxyde d’azote (N₂O) et 30 % d’oxygène (O₂). L’anesthésie est considérée comme suffisante lorsque la souris ne répond plus à un stimulus mécanique appliqué à sa queue. Maintenez la température corporelle des souris à 36,5 ± 0,5 °C à l’aide d’une couverture de maintien de la température corporelle reliée à un thermomètre.
3. Enlevez tous les poils de la poitrine et du cou des souris en vous rasant, puis en utilisant une crème dépilatoire. Désinfectez le site chirurgical de la peau avec un gommage à la bétadine en alternant avec de l’alcool deux fois, puis faites une incision d’environ 2 cm de long avec une lame chirurgicale au centre du cou. Isolez soigneusement l’artère carotide commune gauche (ACLC), l’artère carotide externe et la branche de l’artère carotide interne des tissus conjonctifs environnants.
4. Lister l’artère carotide externe et l’artère carotide commune avec une suture chirurgicale (suture en soie 4-0, demi-nœud d’attelage) pour bloquer temporairement le flux sanguin dans l’artère carotide interne pendant l’opération.
5. Insérez une suture en nylon enduit de silicone (monofilament 8-0, 11 mm de long) à travers l’artère carotide interne jusqu’à l’origine de l’ACM gauche. Ajustez l’épaisseur de la partie recouverte de silicium du filament à une plage de 0,10 à 0,12 mm.
6. Mesurez la diminution du débit sanguin cérébral relatif (rCBF) dans le MCA à l’aide d’un débitmètre laser Doppler. Le MCAO sera confirmé lorsque le rCBF sera maintenu à < 20 % des valeurs de l’état de repos pendant toute la période ischémique.
7. Fixez le filament inséré au vaisseau sanguin pendant 2 h pendant que l’artère cérébrale est occluse, puis retirez soigneusement le filament pour rétablir le flux sanguin pendant 22 h de reperfusion. Suturez la peau en cousant à cinq endroits (suture en soie 3-0, deux demi-nœuds d’attelage) et permettez à chaque souris de se réveiller de l’anesthésie.

Matériaux