Amélioration de l'induction apoptotique et autophagique par un roman synthétique C-1 analogique de 7-désoxypancratistatine dans l'adénocarcinome du sein humain et les cellules de neuroblastome avec le tamoxifène

Résumé

Nous avons synthétisé un analogue roman de pancratistatine comparables, avec activité anti-cancéreuse comme pancratistatine natif; intéressant, le traitement combinatoire avec le tamoxifène a abouti à une amélioration drastique dans l'induction de l'apoptose et l'autophagie par mitochondrial avec un effet minimal sur les fibroblastes non cancéreuses. Ainsi, JCTH-4 en combinaison avec le tamoxifène pourrait fournir un coffre-fort thérapie anti-cancéreuse.

Résumé

Le cancer du sein est l'un des cancers les plus fréquents chez les femmes en Amérique du Nord. De nombreux courants traitements anti-cancéreux, y compris les rayonnements ionisants, induire l'apoptose par une lésion de l'ADN. Malheureusement, ces traitements ne sont pas sélectifs pour les cellules cancéreuses et de produire une toxicité similaire dans les cellules normales. Nous avons signalé l'induction sélective de l'apoptose dans les cellules cancéreuses par le pancratistatine composé naturel (PST). Récemment, un roman PST analogique, un dérivé de C-1 de 7-acétoxyméthyl désoxypancratistatine (JCTH-4), a été produit par la synthèse de novo et elle présente une activité sélective comparables induisant l'apoptose dans plusieurs lignées cellulaires cancéreuses. Récemment, l'autophagie a été impliqué dans les tumeurs malignes à la fois comme pro-survie et les mécanismes de la mort pro-en réponse à la chimiothérapie. Le tamoxifène (TAM) a toujours montré l'induction de la pro-survie autophagie dans de nombreux cancers. Dans cette étude, l'efficacité de JCTH-4 seul et en combinaison avec TAM pour induire la mort cellulaire dans Cance maternelr (MCF7) et le neuroblastome (SH-SY5Y) des cellules a été évaluée. TAM seul induit l'autophagie, mais la mort des cellules insignifiant alors JCTH-4 seul causé une induction significative de l'apoptose avec une certaine induction de l'autophagie. Fait intéressant, le traitement combinatoire conduit à une augmentation drastique dans l'induction de l'apoptose et l'autophagie. Nous avons suivi en fonction du temps des changements morphologiques dans les cellules MCF7 subissant TAM-induite autophagie, JCTH-4-apoptose induite et l'autophagie et la mort cellulaire accélérée avec le traitement combinatoire en utilisant la microscopie time-lapse. Nous avons démontré ces composés à induire l'apoptose / autophagie par un ciblage mitochondrial dans ces cellules cancéreuses. Surtout, ces traitements n'ont pas affecté la survie de fibroblastes humains non cancéreuses. Ainsi, ces résultats indiquent que JCTH-4 en combinaison avec TAM pourrait être utilisée comme un coffre-fort et très puissant anti-cancer thérapie contre le cancer du sein et des cellules de neuroblastome.

Protocole

Introduction

L'apoptose, ou de type I la mort cellulaire programmée, est un processus physiologique qui peut fonctionner extrinsèquement, via la liaison d'un ligand à un récepteur de mort la mort, ou intrinsèquement. La voie intrinsèque de l'apoptose est déclenchée par le stress intracellulaire tels que les dommages de l'ADN et la dysfonction mitochondriale, ce qui conduit finalement à la perméabilisation de la mitochondrie, la dissipation du potentiel de membrane mitochondriale (MMP), la libération de facteurs apoptogènes de l'espace intermembranaire mitochondrial, et l'exécution subséquente de l'apoptose ^1.....

Discussion

Composés PST et similaires ont été montré pour avoir des propriétés anticancéreuses ^11-15,21. Nous avons précédemment rapporté PST naturelle de déstabiliser sélectivement les mitochondries dans les cellules cancéreuses, ce qui induit l'apoptose ainsi par la libération de facteurs de apoptogènes ^12,14. Il est fort probable que JCTH-4 actes par le biais du même mécanisme; JCTH-4 a causé l'effondrement MMP dans les cellules MCF7 comme on le voit avec une coloration TMRM (Fig. 5a),

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom du produit	Entreprise	Numéro de catalogue
Lignée cellulaire SH-SY5Y	ATCC	LCR-2266
Dulbecco Eagles jour moyen F-12 HAM	Sigma-Aldrich	51448C
Sérum de veau fœtal	Gibco BRL	16000-044
Lignée cellulaire MCF7	ATCC	HTB-22
Milieu RPMI-1640	Sigma-Aldrich	R 0883
Apparemment humain normal du fœtus en ligne cellulaire de fibroblastes (NFF)	Coriell Institute for Medical Research	AG04431B
Eagle modifié par Dulbecco à moyen, moyen de glycémie élevée	Thermo Scientific	SH30022.01
Sel de citrate de tamoxifène	Sigma-Aldrich	T9262
35 mm à fond de verre plats culture	MatTek	P35G-014-C
Leica DMI6000 B microscope inversé	Leica Microsystems	N / A
Colorant Hoechst 33342	Molecular Probes	H3570
Leica DM IRB microscope à fluorescence inversé	Leica Microsystems	N / A
Annexine V-488 AlexaFluor	Invitrogen	A13201
Bleu de Trypan solution	Sigma-Aldrich	T8154-20ML
Hémocytomètre	Fisher Scientific	267110
WST-1 réactif	Roche Applied Science	11644807001
Wallac Victor 3 1420 Multilabel contre	PerkinElmer	1420-011
Tétraméthylrhodamine ester méthylique (TMRM)	Gibco BRL	T-668
Broyeur de tissus de verre	Fisher Scientific	K8885300-0002
Dosage de protéines BioRad	Bio-Rad Laboratories	500-0001Bottom du formulaire
Amplex Rouge	Invitrogen	A12222
Peroxydase de raifort (HRP)	Sigma-Aldrich	P8125
SpectraMax Gemini XPS	Molecular Devices	3126666
Anti-LC3 anticorps dirigé chez le lapin	Novus Biologicals	NB100-2220
Anti-souris HRP-anticorps secondaire conjugué à	Abcam	ab6728
Anti-lapin HRP-anticorps secondaire conjugué à	Abcam	ab6802
Substrat de la peroxydase chimiluminescence	Sigma-Aldrich	CPS160
Monodansylcadavérine	Sigma-Aldrich	30432