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Entretien des lignes spécifiques de l'antigène des cellules T ou de clones en culture exige tours de l'antigène de l'activation induite séparées par des phases d'expansion de 1,2 cellule. Ajout de l'interleukine 2 au milieu de culture pendant la phase d'expansion est nécessaire pour prévenir la mort cellulaire et suffisantes pour maintenir à court terme des lignées de cellules T, mais a été montré pour augmenter la polarisation Th1 3. Remplacement de l'interleukine 2 par le facteur de croissance des cellules T (TCGF) qui contient un mélange de cytokines est plus efficace que l'interleukine 2 dans le maintien à long terme des lignées de cellules T in vitro 3. Par ailleurs, TCGF peut facilement être préparé en grandes quantités dans le laboratoire et est beaucoup moins cher que interleukine 2.
Ici, nous montrons comment préparer TCGF à partir de surnageants de culture de splénocytes de rats. Pour cette procédure, nous récoltons les rates de rats Lewis naïve euthanasiés pour le thymus et la collecte de sang. Nous préparons une seule cellule suspensions à partir des rates, lyser les globules rouges par choc osmotique, et les graines des splénocytes en milieu de culture. Les cellules sont stimulées par la concanavaline A, un mitogène que les non-sélective active tous les lymphocytes T chez le rat, induisant la production de cytokines. Le surnageant de culture sont recueillies 48 heures plus tard andexcess concanavaline A est lié à l'alpha méthyl mannoside pour l'empêcher d'activer lignées de cellules T à laquelle TCGF sera ajouté. Le TCGF est alors une filtration stérile, aliquotés et conservés à -20 ° C.