Ce protocole décrit l'isolement de tissu adipeux dérivé des cellules stromales de lipoaspirate et la création d'une 4 mm de taille critique défaut crânienne pour évaluer la régénération osseuse.
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Article de méthode
Réparation d'un modèle de critique des défauts de taille crânienne Utilisation adipeuses cellules stromales prélevés sur des Lipoaspirate
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Craniofaciale réparation et la régénération osseuse offre la promesse de la formation de novo des tissus grâce à une approche basée sur des cellules en utilisant des cellules souches. Adipeuses cellules stromales (ASC) se sont révélés être une source abondante de cellules souches multipotentes capables de subir ostéogénique, chondrogénique différenciation, adipogénique et myogénique. De nombreuses études ont exploré le potentiel ostéogénique de ces cellules in vivo avec l'utilisation de biomatériaux divers échafaudages pour la livraison cellulaire. Il a été démontré qu'en utilisant une ostéoconducteur, recouverte d'hydroxyapatite poly (acide lactique-co-acide glycolique) (PLGA-HA) échafaudage ensemencé avec CSA, un défaut critique entreprises crânienne, un défaut qui est défini par son incapacité à subir spontanée la guérison au cours de la vie de l'animal, peuvent être effectivement montrer robuste régénération osseuse. Ce modèle in vivo démontrent la base de l'approche translationnelle visant à régénérer le tissu osseux - le cellulairecomposant et la matrice biologique. Cette méthode sert de modèle pour l'application ultime clinique d'une cellule souche vers la réparation d'un défaut spécifique au tissu.
Protocole
1. Isolement cellulaire et l'expansion
- Tout le consentement du patient et des protocoles expérimentaux ont été examinés et approuvés par l'Université de Stanford institutionnel commission d'examen (Protocole # 2188 et # 9999).
- Obtenir humaine tissu adipeux sous-cutané des procédures électives lipoaspiration sous local / anesthésie générale.
- Il y aura deux couches dans le lipoaspirate (figure 1A). Le surnageant contient la grande majorité de la matière traitée cellulaire. La couche inférieure est le plus souvent injecté une solution saline. Adipeuses cellules stromales peuvent être récoltées à partir ....
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Discussion
Depuis l'isolement de tissu adipeux dérivé des cellules stromales de 2 lipoaspirate, ces cellules ont été différenciées en une grande variété de lignées cellulaires. Le tissu adipeux est d'origine mésodermique et, par conséquent, multipotentes dérivées du tissu adipeux cellules stromales sera probablement plus efficace avec une application vers un lignage mésodermique. La capacité à générer du tissu squelettique est particulièrement important compte tenu de la pénurie de sites donneurs pour une autogr.......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d'intérêt déclaré.
Remerciements
Nous tenons à remercier le Dr George communes et le Dr Dean Vistnes pour leur soutien et la collaboration de nos recherches. Ce travail est soutenu par l'Institut national de bourses de recherche dentaire et craniofaciale 1 R21 DE019274-01, RC2 et R01EB009689 DE020771-02, la Fondation Oak et Hagey Laboratoire de médecine régénérative de pédiatrie à MTL Dr Hyun est pris en charge par le Saint Joseph Mercy Hospital GME .
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Nom du réactif: | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires (optionnel) |
| Lipoaspirate récolte | |||
| PBS | Gibco | 10010-023 | |
| Hank Balanced Salt Solution | Cellgro | 21-023 CV- | |
| Collagénase | Sigma | C6885-500MG | |
| Crépine cellule 100 um | BD Falcon | 352360 | |
| Steri-dessus 500 ml 0,22 um filtre | Millipore | SCGPT05RE | |
| Défaut crânienne | |||
| Z500 Brushless MicromotorsUM50C | NSK | NSKZ500 | |
| Couteau circulaire 4,0 mm | Xemax chirurgicale | CK40 |
Références
- Levi, B., James, A. W., Nelson, E. R. Human adipose-derived stromal cells heal critical size mouse calvarial defect. PLoS One. 5, (2010).
- Zuk, P. A., Zhu, M., Ashjia, P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, 42....
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Réimpressions et autorisations
