Isolement des lymphocytes de souris muqueuses génitales Tract

Résumé

Un moyen efficace pour isoler les lymphocytes de souris tractus génital est décrite. Cette méthode tire parti de la digestion enzymatique et séparation par gradient de Percoll pour permettre l'isolement efficace. Cette technique est également adaptable pour une utilisation à d'autres espèces

Résumé

Les muqueuses, y compris dans les voies gastro-intestinales, génito-urinaire, respiratoire et, fournir des portes d'entrée pour les agents pathogènes, comme les virus et les bactéries ^1. Muqueuses sont également des sites inductifs dans l'hôte afin de générer une immunité contre les agents pathogènes, tels que les patchs Peyers dans le tractus intestinal et le tissu nasal lymphoréticulaire associé dans les voies respiratoires. Cette caractéristique unique permet de l'immunité des muqueuses comme un acteur incontournable du système de défense de l'hôte. De nombreuses études ont porté sur digestives et respiratoires dans les muqueuses. Cependant, il ya eu peu d'études de la reproduction des muqueuses. La muqueuse du tractus génital est le site d'infection primaire des maladies sexuellement transmissibles (MST), y compris les infections bactériennes et virales. MST sont un des problèmes de santé les plus critiques auxquels est confronté le monde d'aujourd'hui. Centers for Disease Control and Prevention estime qu'il ya 19 millions de nouveaux infectieuse chaque année aux États-Unis. STDs le coût du système de santé américain 17 milliards de dollars chaque année ^2, et les individus de coûts encore plus en conséquences immédiates et à long de la vie. Pour faire face à ce défi, une meilleure compréhension de l'immunité muqueuse reproduction est nécessaire et isoler des lymphocytes est une composante essentielle de ces études. Ici, nous présentons une méthode reproductible pour isoler les lymphocytes murins de voies génitales femelles pour les études immunologiques qui peuvent être modifiés pour s'adapter à d'autres espèces. La méthode décrite ci-après est basé sur une souris.

Protocole

1. Retrait de l'appareil génital

1. Euthanasier la souris en utilisant les lignes directrices approuvées. Faire une incision médiane bas et retirer la peau.
2. Isoler et supprimer tout appareil génital, de l'oviducte dans l'ouverture du vagin.
3. Ouvrez l'ensemble du tractus longitudinalement avec des ciseaux.
4. Couper les voies génitales avec de beaux ciseaux chirurgicaux en petits morceaux (environ <1mm) dans une boîte de Pétri avec RPMI-10/EDTA complète (voir la formule ci-dessous) et agiter le tissu dans 125 ml flacon à température ambiante sur un agitateur magnétique réglé pour 15 min. Cette procédure est répétée deu....

Discussion

Dans ce protocole, il est montré comment préparer des lymphocytes de souris voies génitales et est facilement maîtrisé. Le point le plus critique de ce processus est de maintenir la viabilité des cellules en gardant les cellules sur la glace. Le rendement cellulaire de cette méthode dépend de la technique, la gestion des compétences, le statut infectieux de la souris (ou naïve jour après l'infection), l'agent pathogène (bactérie, virus, champignon) et la section de la souris examiné l'appareil reproducteur (.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom	Entreprise	Numéro de catalogue
Collagénase	Sigma Sciences de la Vie	C2139-1G
Percoll	GE Healthcare Bio-Sciences	17-0891-01
RPMI1640	Gibco par Life Technologies	11875