Basée sur sonde endomicroscopie confocale laser de l'appareil urinaire: La Technique

Résumé

Sonde à base endomicroscopie confocale permet la microscopie en temps réel de l'appareil urinaire humain durant la cystoscopie, fournissant dynamique, imagerie intravitale d'états pathologiques tels que le cancer de la vessie avec une résolution cellulaire. Endomicroscopie peut augmenter la précision diagnostique de l'endoscopie standard de la lumière blanche et donner des orientations pour améliorer l'image peropératoire résection chirurgicale.

Résumé

Sonde laser confocal à base endomicroscopie (CLE) est une technique d'imagerie optique émergeant qui permet en temps réel en microscopie in vivo de la surface des muqueuses pendant endoscopie standard. Avec les applications en cours dans les voies respiratoires ¹ et gastro-intestinal, ^2-6 CLE a également été explorée dans les voies urinaires pour le diagnostic du cancer de la vessie. ^7-10 morphologie cellulaire et tissulaire microarchitecture peuvent être résolus avec la résolution échelle du micron en temps réel, en plus de imagerie dynamique de la vascularisation normale et pathologique ^7.

La sonde à base CLE système (Cellvizio, Mauna Kea Technologies, France) est constitué d'une sonde à fibre optique d'imagerie réutilisable couplée à une unité de balayage laser 488 nm. La sonde d'imagerie est inséré dans les canaux de travail de types endoscopes flexibles et rigides. Un endoscope basé CLE système (Optiscan, Australie), dans lequel le functionalit endomicroscopie confocaley est intégré sur l'endoscope, est aussi utilisé dans le tractus gastro-intestinal. Compte tenu de la portée plus large diamètre, cependant, l'application dans les voies urinaires est actuellement limité à l'utilisation ex vivo ^11. Acquisition d'image confocale se fait par contact direct de la sonde d'imagerie avec le tissu cible et enregistré sous forme de séquences vidéo. Comme dans le tractus gastro-intestinal, endomicroscopie de l'appareil urinaire nécessite un agent de contraste exogenenous-fluorescéine plus souvent, ce qui peut être administré par voie intraveineuse ou par voie intravésicale. Administration intravésicale est une méthode bien établie pour introduire des agents pharmacologiques au niveau local avec une toxicité systémique minimale qui est unique à l'appareil urinaire. Fluorescéine rapidement les taches de la matrice extracellulaire et a un profil de sécurité établi. ¹² sondes d'imagerie de différents diamètres permettre la compatibilité avec les endoscopes de calibre différents. À ce jour, 1,4 et 2,6 mm sondes ont été évalués avec flexible et ricystoscopie gid ^10. disponibilité récente d'un <1 mm Sonde d'imagerie ¹³ ouvre la possibilité de CLE dans le haut appareil urinaire au cours de l'urétéroscopie. Fluorescence cystoscopie (c.-à-diagnostic photodynamique) et l'imagerie à bande étroite existe d'autres endoscope à base de modalités d'imagerie optiques ¹⁴ qui peuvent être combinés avec des CLE pour atteindre imagerie multimodale des voies urinaires. À l'avenir, CLE peut être couplé avec des agents de contraste moléculaires tels que les peptides marqués par fluorescence ¹⁵ et des anticorps pour l'imagerie endoscopique de processus pathologiques avec une spécificité moléculaire.

Protocole

1. Préparation du patient

1. Le consentement du patient prévu pour la cystoscopie de diagnostic et d'autres procédures endo-urologiques telles que la résection transurétrale de la tumeur vésicale (TURBT) pour CLE. Inclure dans l'autorisation d'une description de l'utilisation de la fluorescéine intravésicale et / ou intraveineuse comme l'agent de contraste. Informez-vous des antécédents de réaction d'hypersensibilité à la fluorescéine.
2. Patient est positionné pour la cystoscopie (généralement en position gynécologique) et préparé de façon stérile.
3. Procéder à la norme cystoscopie en lumière blanche (WLC) avec un cystoscope rigide ou flexible à travers l'urètre.
4. Enquête toutes les régions de la vessie sous une lumière blanche (figure 1) et notez régions d'intérêt pour l'enquête CLE.
5. En plus de WLC, la vessie peut être visualisée à l'aide d'autres modalités d'imagerie optiques macroscopiques dont la fluorescence cystoscopie (figure 2A) ou l'imagerie à bande étroite (Figure 2B) Numéro d'entify d'autres domaines de suspicion suivie par la caractérisation des CLE.
6. Utiliser une électrode de cautérisation ou anse de résection pour placer une marque cautère petite adjacente aux régions d'intérêt qui seront tous deux imagés et une biopsie de confirmation pathologique. La marque cautérisation facilite re-localisation pour la suite CLE imagerie et la biopsie.

2. Agent de contraste

1. Instillation intravésicale d'agent de contraste
   1. Préparer par dilution clinique de sodium de qualité fluorescéine à 10% dans une solution saline normale stérile (NaCl 0,9%) à la concentration souhaitée. Par exemple, préparer 400 ml de fluorescéine 0,1% en diluant 4 ml de fluorescéine à 10% dans 396 ml de solution saline normale.
   2. Insérer un cathéter stérile dans la vessie urinaire et insuffler un agent de contraste dilué par gravité à l'aide d'un cathéter 60 ml-embout de seringue.
   3. Fixer la sonde urinaire à demeure à tenir agent de contraste pendant 5 min.
   4. Égoutter agent de contraste de la vessie. Utilisez le ca 60 mltheter-embout de la seringue pour rincer le contraste résiduelle de la vessie utilisant une solution saline normale, environ 240-300 ml.
   5. Passez à l'imagerie CLE.
2. L'injection intraveineuse de fluorescéine
   1. Aspirer 1,0 ml de fluorescéine dans la seringue. Fixez la seringue pour l'accès intraveineux et injecter 0,5 - 1,0 ml de fluorescéine intraveineuse en bolus. Rincer ligne avec une solution saline normale. Cela se fait habituellement par l'équipe d'anesthésie en salle d'opération.
   2. Passez à l'imagerie CLE.

3. CLE Imaging

1. Retirer la sonde d'imagerie stérilisés CLE (Cellvizio) de son emballage et branchez l'appareil à balayage laser (Mauna Kea Technologies, Paris, France)
2. Echauffez-vous et calibrer la sonde d'imagerie en suivant les instructions du fabricant.
3. Réinsérez le cystoscope ou résectoscope dans la vessie. Utilisez un objectif de 0 degré avec le cystoscope rigide.
4. Faire progresser la CLE sonde d'imagerie le long de la working canal du cystoscope avec la pointe juste au-delà du cystoscope.
5. En lumière blanche, localiser les régions précédemment marqués d'intérêt. Utiliser une solution saline normale irrigation supplémentaire si nécessaire pour la visualisation de la muqueuse et de maintenir une distension de la vessie modérée.
6. Manipuler CLE sonde d'imagerie avec la main de l'opérateur pour un contact directe en face à des régions d'intérêt. Sectionnement optique pour des régions d'intérêt, doucement augmenter et diminuer la pression de la sonde d'imagerie tout en maintenant le contact direct.
   1. Pour atteindre les tumeurs situées à la vessie antérieure, une norme Albarran pont peut aider à faciliter déviation de la sonde d'imagerie pour un contact direct avec la région d'intérêt (figure 2C).
7. Régions d'intérêt communs comprennent tumeur papillaire, non papillaire tumeur, la transition entre la muqueuse d'apparence normale et tumorale, et des plaques érythémateuses, qui peuvent tous être visualisés en utilisant soit intraveineusessique ou l'administration par voie intraveineuse de fluorescéine. Intraveineuse de fluorescéine est nécessaire pour l'imagerie du lit de résection, de l'urètre prostatique, et l'urètre du pénis.
8. Comme la sonde d'imagerie analyse d'images région d'intérêt record, pour une analyse ultérieure. Notez globale morphologie cellulaire, limite, l'organisation et la présence de la néo-angiogenèse.
9. À la fin de l'imagerie, retirez CLE sonde d'imagerie de canal de travail.
10. Si vous le souhaitez, obtenir froid tasse de biopsies provenant de régions correspondantes d'intérêt qui ont été analysés par CLE. Utiliser les marques de cautérisation des points de repère pour la co-registration des zones imagées qui sont biopsiés.
11. Remplissez TURBT par routine. Chez les patients qui ont reçu par voie intraveineuse de fluorescéine, pensez à utiliser résectoscopes à flux continu pour améliorer la visualisation lors de la résection, la fluorescéine est excrétée par le rein dans la vessie environ 5 minutes après l'administration par voie intraveineuse.
12. Récupérer les enregistrements d'images enregistrées à partir confocale processeur et propianalyse d'image CT.

Résultats

CLE images sont enregistrées en niveaux de gris des fichiers de séquences vidéo à 12 images par seconde. L'interprétation des images se fait en temps réel et peuvent être utilisés pour influer prise de décision clinique en vertu d'un protocole expérimental. Analyse hors ligne, ce qui comprend l'examen de la séquence vidéo, traitement d'image supplémentaires telles que mosaïquage, ⁷ et comparaison avec la norme pathologie, jouent un rôle important pendant la phase de la courbe d'apprentissage associée à la tec...

Discussion

L'atteinte et le maintien de solides face de contact entre la sonde en imagerie et de la muqueuse de la vessie est l'étape la plus critique dans l'acquisition de la qualité d'image optimale. Il ya environ une courbe d'apprentissage 3-5 patiente de développer la dextérité pour manipuler la sonde d'imagerie et de maintenir la sonde stable pendant l'acquisition des images. En outre, comme cette procédure est menée in vivo, les mouvements respiratoires du patient (p...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom du réactif	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires (optionnel)
Cellvizio 100 Series	Mauna Kea Technologies	Série 100	Comprend un processeur confocale et LSU: F400-v2 à 488 nm
Cellvizio confocale minisonde	Mauna Kea Technologies	Gastroflex UHD
AK-FLUOR 10%	Akorn, Inc	NDC 17478-253-10