Vivre imagerie de dédouanement cellulaire par apoptose au cours<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryogenèse

Résumé

Nous décrivons ici une méthode efficace pour étudier la dynamique de la clairance des cellules apoptotiques In vivo. Cette méthode emploie vivre Drosophila Embryons comme un modèle puissant pour la surveillance phagocytose des cellules apoptotiques en utilisant un marquage spécifique des cellules apoptotiques et les phagocytes.

Résumé

L'élimination correcte des cellules indésirables ou aberrante par apoptose et la phagocytose ultérieure (clairance cellulaire par apoptose) est cruciale pour le développement normal chez tous les organismes pluricellulaires. Clairance cellulaire par apoptose est un processus hautement dynamique, intimement associée à la mort cellulaire, les cellules apoptotiques unengulfed sont à peine vus in vivo dans des conditions normales. Afin de comprendre les différentes étapes de dégagement des cellules apoptotiques et de comparer les phagocytes «professionnels» - les macrophages et les cellules dendritiques de «non-professionnel» - cellules voisines tissu-résidents, l'imagerie in vivo en direct du processus est extrêmement précieux. Ici, nous décrivons un protocole pour l'étude de clairance des cellules apoptotiques dans les embryons de drosophile en direct. Pour suivre la dynamique des différentes étapes de la phagocytose que nous utilisons marqueurs spécifiques des cellules apoptotiques et les phagocytes. En outre, nous pouvons surveiller deux systèmes phagocyte en parallèle: les macrophages «professionnels» et «semi-profeglie ssional »dans le système nerveux central en développement (SNC). La méthode décrite ici utilise l'embryon de drosophile comme un excellent modèle pour l'étude en temps réel de la clairance des cellules apoptotiques.

Introduction

L'élimination correcte des cellules indésirables ou aberrante par apoptose et la phagocytose ultérieure est crucial pour le développement embryonnaire ainsi que pour l'homéostasie tissulaire chez l'adulte. Phagocytose des cellules apoptotiques ou l'autorisation cellulaire par apoptose est un processus très dynamique qui se déroule en quatre étapes: (1) le recrutement de phagocytes à la cellule apoptotique («Trouvez-moi»), (2) la reconnaissance de la cellule comme une cible pour la phagocytose ( «eat-me») et (3) l'engloutissement, suivi par (4) maturation du phagosome et de la dégradation de la particule apoptoti....

Protocole

Pour suivre la dynamique de l'élimination des cellules apoptotiques in vivo deux populations de cellules doivent être étiquetés: les cellules phagocytaires et les cellules apoptotiques.

Pour marquer des populations de cellules phagocytaires nous utilisons une ligne Drosophila contenant le marqueur simu-cytGFP, qui marque les cellules phagocytaires exclusivement dans l'embryon: les macrophages, les cellules gliales et de l'ectoderme ^8. On peut utiliser différents marqueurs pour les cellules phagocytaires, y compris les lignes contenant un pilote Gal4 hemocyte spécifique (CRQ-Gal4) ....

Résultats

images représentatives d'un film dans lequel les cellules apoptotiques sont étiquetés avec l'annexine V et cellules gliales, ectoderme et les macrophages sont étiquetés avec simu-cytGFP sont présentés dans la figure 2. Chaque image est une projection de 3 tranches de 2 um chacun.

L'embryon de l'étape 15 est correctement positionné montrant le SNC embryonnaire dans le milieu de la glie bien étiquetés (g). Macrophages (M), qui sont pour la plupart à l&.......

Discussion

Clairance cellulaire par apoptose est une dernière étape critique de l'apoptose, qui est hautement dynamique. Par conséquent études en temps réel du processus sont d'une importance capitale. Nous décrivons ici un protocole qui permet la surveillance de la clairance des cellules apoptotiques dans le développement des embryons de drosophile vivre. Dans cette procédure, deux populations de cellules doivent être marqués à l'aide de marqueurs spécifiques: les cellules apoptotiques et les phagocytes. Le j.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Réactif
Annexine V	Sondes moléculaires	A35108
PhiPhiLux G2D2	OncoImmunin	A304R2G-5
Sondes moléculaires	LysoTracker	L-7528
Huile d’halocarbure 700	Sigma	H8898
< strong>Material
Tube capillaire	FHC	30-30-0
Crépine à cellules	SPL	93100
Pinceau