Mesure de l'allodynie tactile dans un modèle murin de la prostatite bactérienne

Résumé

Infection de la prostate peut être un facteur contribuant à la médiation douleur pelvienne chez la prostatite chronique. Nous décrivons la procédure de préparation de l'inoculum bactérien standardisé, l'instillation de bactéries dans l'urètre chez les souris mâles et une méthodologie pour mesurer l'allodynie tactile chez la souris au fil du temps.

Résumé

Uropathogènes Escherichia coli (UPEC) sont des pathogènes qui jouent un rôle important dans les infections des voies urinaires et de la prostatite bactérienne ^1. Nous avons récemment montré que UPEC ont un rôle important dans le déclenchement de la douleur pelvienne chronique ^2, une caractéristique de la prostatite chronique / syndrome de la douleur pelvienne chronique (CP / CPPS) ^3,4. Infection de la prostate cliniquement pertinente par UPEC peut initier et mettre en place la douleur chronique par des mécanismes pouvant entraîner des lésions tissulaires et l'initiation des mécanismes d'auto-immunité ^5.

Un défi à la compréhension de la pathogenèse de l'UPEC dans la prostate est l'inaccessibilité relative de la glande de la prostate à la manipulation. Nous avons utilisé une méthode précédemment décrite infection intra-urétrale ⁶ pour fournir une souche clinique de UPEC dans des souris mâles établissant ainsi une infection ascendante de la prostate. Ici, nous décrivons nos protocoles pour normaliser la bacterial inoculum ^7, ainsi que la procédure de cathétérisme sous anesthésie les souris mâles à une instillation de bactéries.

CP / CPPS est essentiellement caractérisé par la présence d'allodynie tactile ^4. Test comportement était basé sur le concept de l'hyperalgésie cutanée résultant de visées ^8-10 douleurs viscérales. Un accent irritable dans les tissus viscéraux réduit les seuils de douleur cutanée permettant une réponse exagérée à normalement non douloureuses stimuli (allodynie). Application de la force normale à la peau en raison des réactions anormales qui ont tendance à augmenter avec l'intensité de la douleur viscérale sous-jacente. Nous décrivons la méthodologie de NOD / ShiLtJ souris qui utilisent von Frey fibres de quantifier l'allodynie tactile au fil du temps en réponse à une seule infection par des bactéries UPEC.

Protocole

1. Préparation des bactéries pour inoculation à la souris

Ce qui suit doit être fait dans des conditions aseptiques.

1. Prendre un 17 x 100 mm tubes en polypropylène avec bouchons et ajouter 3 ml de bouillon Luria frais (LB) médias. En utilisant des pointes autoclave, prenez le stock de glycerol congelé bactéries de la souche CP1 ² et transférer une petite quantité de la culture dans le tube contenant le milieu LB. Remplacer le bouchon du tube de sorte que l'oxygène est encore capable de pénétrer dans le tube - la culture a besoin de grandir dans des conditions aérobies. Placer le tube à 37 ° C dans un incubateur ag....

Résultats

Nous avons examiné des souris NOD / ShiLtj et C57BL/6J mâles de la présence de la douleur chronique lors d'une infection bactérienne. Des souris mâles (5 à 7 semaines) ont été instillées avec une solution saline ou de bactéries dans l'urètre (Figure 1). La stimulation mécanique de la région pelvienne avec des filaments de von Frey de souris C57BL/6J solution saline et inculqué UPEC-infectés souris C57BL/6J donné lieu à une réponse en fréquence qui n'a pas changé au cours de 28 jours de.......

Discussion

Infection de la prostate de souris avec UPEC permet d'en modélisation in vivo des événements qui peuvent être impliqués dans la pathogenèse de la prostatite bactérienne, CP / CPPS ou comme un événement prédisposant à une inflammation chronique. Les méthodes décrites pour la préparation bactérienne et l'instillation tirage sur un vaste corpus de littérature sur les modèles UPEC dans l'infection des voies urinaires femelle ^7,14. Le modèle a une large applicabilité pour l'étude .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom du réactif	Entreprise	Numéro de catalogue
Les tubes de culture	BD Falcon	352059
LB Broth Miller	EMD	EM1.10285.0500
Tubes à centrifuger Nalgene	Thermo	3118-0050
L'isoflurane	Butler Schein	NDC 11695-6776-1
30G aiguille cathéter	Hamilton	91030
PE10 tube	BD intramedic	427400
Filaments von Frey	Stoelting	58025-31