Détermination de la vidange gastrique avec un non-invasive [ 13 C]-octanoïque test respiratoire à l'acide pour la gastroparésie suivi dans des souris femelles NOD LTJ.
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Article de méthode
Évaluation de la vidange gastrique chez des souris diabétiques non obèses aide d'un [
Dans cet article
Résumé
Résumé
Gastriques études vidange chez la souris ont été limités par l'incapacité à suivre les changements de vidange gastrique chez le même animal, depuis les techniques les plus couramment utilisées nécessitent l'abattage des animaux et la récupération post-mortem de l'1,2 repas. Cette approche empêche études longitudinales afin de déterminer les modifications de la vidange gastrique avec l'âge et la progression de la maladie. L'couramment utilisés [13 C]-octanoïque test respiratoire à l'acide pour l'homme 3 a été modifié pour une utilisation chez les souris et les rats 06.04 7 et nous avons précédemment montré que ce test est fiable et sensible aux variations de la vidange gastrique en réponse à la drogue et au cours de progression de la maladie diabétique 8. Dans cette vidéo de présentation du principe et de la mise en œuvre pratique de ce test modifié est expliqué. Comme dans l'étude précédente, les souris NOD LTJ sont utilisés, un modèle de diabète de type 1 9. Une partie de ces souris développent les symptômes de la gastroparésie, une complication de diabetes caractérisé par la vidange gastrique retardée, sans obstruction mécanique de l'estomac 10.
Cet article montre comment former les souris pour le test, la façon de préparer le repas test et obtenir 4 h gastriques données vidange et comment analyser les données obtenues. L'analyseur d'isotopes du carbone utilisé dans la présente étude est approprié pour le prélèvement automatique des échantillons d'air à partir de 12 souris en même temps. Cette technique permet au suivi longitudinal de la vidange gastrique des grands groupes de souris atteintes de diabète ou d'autres maladies de longue date.
Introduction
Ce manuscrit décrit les considérations techniques et méthodologiques liées à la mesure non invasive de la vidange gastrique chez la souris. En suivant le protocole décrit ici, les enquêteurs de façon fiable et reproductible suivre l'évolution de la vidange gastrique due au développement de la maladie, d'étudier l'impact des agents pharmacologiques sur la vidange gastrique et le suivi de la réponse de la vidange gastrique pour le traitement de maladies sous-jacentes ou les défauts 6,8, 11,12. Dans les publications antérieures, l'application de 13 C tests d'haleine acide octanoïque a été montré pour être un moyen utile de mesur....
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Protocole
1. La formation et l'habituation des souris
- Avant l'analyse, mettre toutes les souris dans les enceintes d'essai pour 2-4 heures avec débit d'air constant afin de les habituer aux conditions d'essai. Cela réduit considérablement le niveau de stress qui pourraient causer de détection aberrante de la vidange gastrique. Traiter les souris de la même manière que si l'expérience de la vidange gastrique était en marche. Préparer le jaune d'œuf (voir plus loin) sans ajouter de l'acide octanoïque et nourrir 0,2 g à chaque souris.
- Répétez ce processus jusqu'à ce que les souris sont suffisamment formés (en général 2-3 fo....
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Résultats
A données représentatives établies à partir de trois différentes souris est illustré à la figure 2. Le graphique noir représente les points de données provenant d'une souris avec la vidange gastrique normale. Elle montre la fraction de 13 C qui est récupérée dans l'air expiré, exprimée en pourcentage de la dose administrée par heure, exprimée en fonction du temps. La courbe bleue est d'une souris avec une accélération de la vidange gastrique avec une valeur moitié de T 40 min et l.......
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Discussion
La technique décrite ici permet d'répétées et non invasive la mesure in vivo de la vidange gastrique solide chez la souris. Ce système présente l'avantage que les animaux ne sont pas retenus dans la chambre de mesure, ce qui leur permet de se déplacer et de tourner librement. Comme il s'agit d'un environnement peu familier, les souris ont encore besoin d'être formés et habitués aux chambres d'essais pour prévenir les effets du stress sur la vidange gastrique. En général, nous su.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs déclarent n'avoir aucun conflit d'intérêts financiers.
Remerciements
Cette publication vidéo a été rendue possible grâce au financement de l'Institut national du diabète et des maladies digestives et rénales (NIDDK) pour le projet de Programme de subventions "pathobiologie du système entérique» DK 68055. Christopher T. Creedon a été soutenue par le public Rochester Ecoles Programme de mentorat.
Nous remercions M. Gary Stoltz pour l'assistance technique, Mme Kristy Zodrow pour l'assistance secrétariat et le Dr Douglas Baer de Los Gatos Research, Inc (Mountain View, CA).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| NOM | ENTREPRISE | NOMBRE CAT | COMMENTAIRES |
| Une source d'amenée d'air constant, le débit et la composition | alimentation en air centrale dans le centre de recherche | ||
| 130 ml chambre d'échantillonnage qui a l'air d'admission, de sortie d'air, et l'ouverture administration des produits alimentaires Tubes en plastique pour alimentation en air | In-house construit | ||
| L'acide octanoïque | Cambridge Isotope Laboratories (Andover, MA) | CLM-293-1 | |
Pour préparer le repas d'œufs:
| Tout fournisseur | Tâcher deêtre cohérent avec le fournisseur oeuf puisque le contenu nutritionnel et la palatabilité des œufs peuvent affecter la vidange gastrique et l'ingestion du repas | |
| Le dioxyde de carbone isotope analyseur | Los Gatos Research Inc (Mountain View, CA) |
Références
- Yeung, C. K., McCurrie, J. R. A simple method to investigate the inhibitory effects of drugs on gastric emptying in the mouse in vivo. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 45, 235-240 (2001).
- Osinski, M. A., Seifert, T. R., Cox, B. F., Gintant, G. A.
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Réimpressions et autorisations
