L&#39;analyse transcriptomique de prélèvements rétine humaine en utilisant Journal

Marie-Noëlle Delyfer; Najate Aït-Ali; Hawa Camara; Emmanuelle Clérin; Jean-François Korobelnik; José-Alain Sahel; Thierry Léveillard

doi:10.3791/50375

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Article de méthode

L'analyse transcriptomique de prélèvements rétine humaine en utilisant Journal

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DOI :

10.3791/50375

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14 août 2013

Marie-Noëlle Delyfer¹^,²^,³^,⁴ , Najate Aït-Ali¹^,²^,³ , Hawa Camara¹^,²^,³ , Emmanuelle Clérin¹^,²^,³ , Jean-François Korobelnik⁴ , José-Alain Sahel¹^,²^,³ , Thierry Léveillard¹^,²^,³

¹U968, Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale, ²UMR S 968, Université Pierre et Marie Curie, ³UMR 7210, Centre National de la Recherche Scientifique, ⁴Départment d'Ophtalmologie, Centre Hospitalier Universitaire de Bordeaux

Dans cet article

Résumé

Nous avons utilisé des échantillons de la rétine rétinectomie pour une analyse transcriptomique de décollement de la rétine. Nous avons développé une procédure qui permet la conservation d'ARN entre les blocs opératoires et les laboratoires. Nous avons standardisé un protocole pour purifier l'ARN par ultracentrifugation de chlorure de césium pour s'assurer que les ARN purifiés sont adaptés à l'analyse des microréseaux.

Résumé

Décollement de la rétine (RD) décrit une séparation de la rétine neurosensorielle de l'épithélium pigmentaire rétinien (EPR). L'EPR est essentiel pour la fonction normale des neurones sensibles à la lumière, les photorécepteurs. Détachement de la rétine de l'EPR crée un espace physique qui est rempli de fluide extracellulaire. RD initie événements indésirables cellulaires et moléculaires qui affectent à la fois la rétine neurosensorielle et l'EPR depuis l'échange physiologique des ions et des métabolites est gravement perturbé. La conséquence de vision est liée à la durée du détachement depuis un réapposition rapide des deux tissus entraîne la restauration de la vision ^1. Le traitement de la RD est exclusivement chirurgical. L'élimination du corps vitré (vitrectomie) est suivie de l'enlèvement partie non essentielle de la rétine autour de la zone individuelle de favoriser un décollement de rétine. Les spécimens rétiniennes enlevées sont res nullius (rien) et, normalement, par conséquent rejetées.Pour récupérer l'ARN à partir de ces prélèvements chirurgicaux, nous avons développé la procédure Journal qui permet la conservation d'ARN pendant le transfert du bloc opératoire au laboratoire. Nous avons également un protocole standardisé pour purifier l'ARN par ultracentrifugation de chlorure de césium pour s'assurer que les ARN purifiés sont adaptés à l'analyse de l'expression génique globale. La qualité de l'ARN a été validé à la fois par RT-PCR et l'analyse des microréseaux. L'analyse des données montre une implication simultanée de l'inflammation et la dégénérescence des photorécepteurs au cours de RD.

Introduction

L'objectif thérapeutique principal de décollement de la rétine (RD) est de trouver un moyen de limiter les dommages aux cellules des photorécepteurs et inflammation de la rétine résultant de la séparation des photorécepteurs à partir des cellules épithéliales pigmentées de la rétine. Au cours de RD, les cellules RPE sont activés, migrer, dédifférencier et prolifèrent à la surface de la rétine décollée, exerçant des forces contractiles conduisant à des complications. Analyse transcriptomique de la RD est un moyen d'identifier les gènes cibles avec une expression modifiée suite RD et donc futures molécules thérapeutiques qui pourraient améliorer le résultat vis....