ARNi médiée double inactivation génique et de mesure de la perception gustative chez les abeilles (<em&gt; Apis mellifera</em&gt;)

Ying Wang; Nicholas Baker; Gro V. Amdam

doi:10.3791/50446

Article de méthode

ARNi médiée double inactivation génique et de mesure de la perception gustative chez les abeilles (

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DOI :

10.3791/50446

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25 juillet 2013

Ying Wang¹ , Nicholas Baker¹ , Gro V. Amdam¹^,²

¹School of Life Sciences, Arizona State University , ²Department of Chemistry, Biotechnology, and Food Science, Norwegian University of Life Sciences

Dans cet article

Résumé

Dans ce protocole, nous décrivons deux stratégies qui suppriment simultanément deux gènes (knockdown double gène) chez les abeilles. Ensuite, nous présentons comment utiliser la réponse d'extension trompe (PER) d'analyse pour étudier l'effet de knockdown double gène sur Honey Bee perception gustative.

Résumé

Cette vidéo montre les nouvelles techniques de l'interférence ARN (ARNi), qui régulent à la baisse deux gènes simultanément dans les abeilles en utilisant l'ARN (l'ARN double brin) injections double brin. Il présente également un protocole de réponse d'extension du proboscis (PER) d'essai pour mesurer la perception gustative.

Inactivation génique médiée par ARNi est une technique efficace la régulation négative de l'expression du gène cible. Cette technique est généralement utilisée pour la manipulation d'un seul gène, mais il a ses limites pour détecter les interactions et les effets conjoints entre les gènes. Dans la première partie de cette vidéo, nous vous présentons deux stratégies pour frapper simultanément sur les deux gènes (appelées knockdown double gène). Nous montrons les deux stratégies sont en mesure de réprimer efficacement deux gènes, vitellogénine (VG) et ultraspiracle (USP), qui sont dans une boucle de rétroaction réglementaire. Cette approche knockdown double gène peut être utilisé pour disséquer les interrelations entre les gènes et peut être facilement appliqué dansdifférentes espèces d'insectes.

La deuxième partie de cette vidéo est une démonstration de l'extension réponse dosage trompe (PER) chez les abeilles après le traitement de knockdown double gène. Le test PER est un test standard pour mesurer la perception gustative chez les abeilles, qui est un indicateur clé de la rapidité de maturation sur le comportement des abeilles est. Grand perception gustative des abeilles nid indique le développement comportemental augmenté, ce qui est souvent associée à un plus jeune âge au début de la recherche de nourriture et d'alimentation spécialisation dans le pollen. En outre, par essai peut être appliqué à identifier les états métaboliques de satiété ou de faim chez les abeilles. Enfin, par dosage combiné avec appariement différents stimuli odorants pour le conditionnement des abeilles est également largement utilisé pour les études de l'apprentissage et la mémoire chez les abeilles.

Introduction

L'interférence ARN (ARNi) est gene silencing post-transcriptionnelle basée sur l'ARN, qui se produit dans une grande variété d'organismes eucaryotes. Le processus de RNAi est déclenchée par l'ARN (ARNdb) précurseurs bicaténaires endogènes ou exogènes. L'ARN double brin active la protéine Dicer de ribonucléase qui lie et clive l'ARN double brin en petits fragments (20-25 pb). Ensuite, les petits fragments d'ARN double brin le guide la reconnaissance et le clivage d'ARNm complémentaires par les protéines Argonaute, un composant catalytique de complexe RNA-induced silencing (RISC) ^1. Chez les mammifères, ARNdb plus de 30 nt, ac....