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Détermination des acides gras tolérables et concentrations de toxine du choléra en utilisant des cellules épithéliales intestinales humaines et BALB / c macrophages de souris

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DOI :

10.3791/50491

30 mai 2013

Dans cet article

Résumé

Nous avons cherché à déterminer les concentrations tolérables de trois acides gras (acides oléique, linoléique et linolénique) et la toxine du choléra qui n'a pas incidence défavorable importante sur la survie des cellules de solubiliser les acides gras et les toxines et leur utilisation dans des essais de survie cellulaire.

Résumé

Le rôle positif des acides gras dans la prévention et la lutte contre les maladies non humains et humains ont été et continuent d'être largement documentés. Ces rôles incluent influences sur les maladies infectieuses et non infectieuses, y compris la prévention de l'inflammation, ainsi que l'immunité des muqueuses aux maladies infectieuses. Le choléra est une maladie intestinale aiguë causée par la bactérie Vibrio cholerae. Il se produit dans les pays en développement et si elle n'est pas traitée, peut entraîner la mort. Bien qu'il existe des vaccins contre le choléra, ils ne sont pas toujours efficaces et d'autres méthodes de prévention sont nécessaires. Nous avons cherché à déterminer les concentrations tolérables de trois acides gras (acides oléique, linoléique et linolénique) et la toxine du choléra en utilisant respectivement souris BALB / C macrophages et les cellules épithéliales intestinales humaines. Nous SOLUBILISE les acides gras ci-dessus et des essais de prolifération des cellules utilisées pour déterminer les gammes de concentration et les concentrations spécifiques des acides gras qui ne sontt préjudiciables à la viabilité des cellules épithéliales intestinales humaines. Nous SOLUBILISE toxine cholérique et utilisé dans un essai pour déterminer les gammes de concentration et les concentrations spécifiques de la toxine cholérique qui ne sont pas statistiquement diminue la viabilité des cellules dans des souris BALB / C macrophages.

Nous avons trouvé les concentrations d'acides gras optimale à entre 1-5 ng / ul, et que pour la toxine cholérique être <30 ng par traitement. Ces données peuvent aider les futures études visant à trouver un rôle muqueuse protectrice pour les acides gras dans la prévention ou l'atténuation des infections de choléra.

Introduction

Les avantages pour la santé des acides gras comme l'acide oléique, linoléique et linolénique ont été et continuent d'être documentés. Par exemple, l'acide oléique permet de faciliter la pénétration des médicaments lipophiles dans l'1,2 corporel, réduit de maladie coronarienne de 24% lorsqu'ils sont substitués pour les acides gras saturés 3, et est utilisé pour traiter les maladies métaboliques telles que l'adrénoleucodystrophie 4 qui est un lié à l'X trouble génétique du métabolisme des acides gras. . Même si un précurseur nécessaire pour l'acide arachidonique chez les mammifères, l'acide linoléique....

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Protocole

1. Tissue Culture

  1. Utilisez Mus musculus macrophages (BALB / c) pour les déterminations de la toxine du choléra. Initialement culture tout de M. cellules musculus en suivant les instructions du fournisseur.
  2. Propager BALB / c cellules de souris dans du milieu de Eagle modifié par Dulbecco avec L-glutamine complété avec 10% de sérum de veau fœtal et 1% 1640 de base antibiotique / antifongique ou RPMI complété avec 10% de sérum de veau foetal, 5% de L-glutamine et 1 % réactif antibiotique / antifongique.
  3. Cultiver les cellules dans 75 cm 2 Corning flacons avec des bouchons ventilés à 37 ° C, 95% d'air et 5% d....

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Résultats

Détermination de la concentration optimale en acides gras

La concentration optimale d'acides gras est définie comme étant la concentration maximale à laquelle la croissance des cellules est comparable ou supérieure à celle des cellules de contrôle, avec relativement faible variabilité des résultats. Pour déterminer la concentration optimale d'acide oléique, les cellules des acides linoléique et linolénique ont d'abord été traités avec des concentrations variables de chaque acide gra.......

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Discussion

Suggestion de concentration des acides gras et la toxine du choléra

Bien que le mécanisme exact de la façon dont les acides gras améliorent l'immunité muqueuse est inconnue, plusieurs études ont tenté d'étudier leurs effets bénéfiques. Notre étude vise à fournir une méthodologie pour déterminer la concentration maximale d'acides gras que les cellules peuvent tolérer ainsi que la concentration maximale de la toxine cholérique que les cellules peuvent tolérer sans une influence signif.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs de cette étude n'ont aucun intérêt financier à partir des résultats de cette étude. Le financement de cette étude a été fourni à FT par l'Université de Kean, mais FT est actuellement employé à Kingsborough Community College.

Remerciements

Nous remercions Paula Cobos et le Dr Evros Vassiliou à l'aide de laboratoire et de fournir les macrophages de souris, respectivement. Nous remercions également notre laboratoire directeur Richard Criasia de conseils et d'aide avec les matériaux. Enfin, les auteurs remercient Ramanpreet Kaur de l'aide à la production vidéo.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Cells/Reagent
Mus musculus macrophagesATCCATCC RAW 264.7
Dulbecco’s Modified Eagle’s MediumATCC30-2002
L-glutamineATCC30-2115
Sérum fœtal bovin Bio-westS0250
Antibiotique/ antimycosique HycloneSV3007901
Cellules épithéliales intestinales humaines ATCCATTC CCL-241
Milieux HybriCare ATCC46-X
Acide oléiqueSigma-AldrichO1008
Acide linoléiqueSigma-AldrichL-1376
Acide linoléniqueSigma-AldrichL-2376
Toxine cholériqueSigma-AldrichC8052
Equipment
BD Falcon 96-Well Cell Culture PlatesBD Biosciences351172
Spectrophotomètre avec logiciel Dynex Revelations 4.22Dynex91000101

Références

  1. Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery. Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).
  2. Tandon, P., et al. X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic ac....

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Mots-clés

Tol rance aux acides grasconcentration de la toxine chol riqueessai MTTprolif ration cellulairesolubilisation des acides grasprotocole de dilution de la toxinetest de viabilit cellulaireplage de concentrations optimales

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