Complexes métalliques anticancéreux: Synthèse et évaluation de la cytotoxicité par le dosage au MTT

Résumé

Procédé pour la synthèse de titane et de vanadium agents anticancéreux sensibles à l'air est décrite, ainsi que l'évaluation de leur activité cytotoxique envers la lignée cellulaire de cancer humain par le test MTT.

Résumé

Titane (IV) et de vanadium (V) les complexes sont des agents anticancéreux très puissants. Un défi dans leur synthèse se réfère à leur instabilité hydrolytique; par conséquent, leur préparation doit être effectuée sous une atmosphère inerte. Evaluation de l'activité anti-cancéreuse de ces complexes peut être réalisée par le test MTT.

Le test MTT est un test colorimétrique basé sur la viabilité de la réduction enzymatique de la molécule de MTT en formazan quand il est exposé à des cellules viables. Le résultat de la réduction est un changement de couleur de la molécule de MTT. Les mesures de l'absorbance par rapport à un contrôle déterminent le pourcentage restant de cellules cancéreuses viables après leur traitement avec des concentrations variables d'un composé testé, ce qui se traduit pour l'activité anticancéreuse du composé et de ses valeurs _{de CI50.} Le test MTT est largement commune dans les études de cytotoxicité en raison de sa précision, la rapidité et la simplicité relative.

Ici nous avons préenvoyer un protocole détaillé pour la synthèse de médicaments à base d'air en métal sensible et les mesures de viabilité cellulaire, y compris la préparation des plaques de la cellule, l'incubation des composés avec des cellules, des mesures de viabilité en utilisant le test MTT, et la détermination des valeurs _{de CI50.}

Introduction

La chimiothérapie est encore l'un des principaux cours de traitements utilisés dans la clinique pour diverses maladies cancéreuses, et donc grande quantité de recherche est menée dans le monde entier dans le but de développer de nouvelles et améliorées des médicaments anticancéreux. Ces études commencent surtout au niveau chimique, la conception et la préparation de composés, suivie par l'évaluation biologique des propriétés cytotoxiques in vitro. La viabilité cellulaire peut être évaluée par des dosages différents qui fournissent des informations sur l'activité cellulaire ^2.1.

Le cisplatine est un exemple ....

Protocole

1. Préparation de la V (V) complexe (figure 2); ¹⁸ conduite étapes 1.1-1.4 dans une boîte à gants, si une boîte à gants n'est pas disponible, passez à l'alternative étapes 2 (2.1-2.6).
   1. Dissoudre 0,42 mmol des ligands H ₂ L dans le THF sec et l'ajouter à une solution sous agitation de quantités équivalentes de VO (O i Pr) ₃ dans le THF.
   2. On agite le mélange réactionnel à la température ambiante pendant 15 minutes, et retirer les substances volatiles sous vide.
   3. Ajouter hexane froid et retirer sous vide. Une poudre violet foncé doit être obtenu avec un rendement quantitatif.
   4. Peser ....

Résultats

Les complexes ont été préparés sur la base de procédures établies ^18,28 et leur pureté peut être évaluée par analyse RMN et élémentaire.

Les données reçues à partir du test MTT est analysé pour évaluer la cytotoxicité du composé ^18,21. Tout d'abord, la soustraction de la valeur d'absorbance de contrôle à blanc à partir de toutes les autres valeurs est réalisée. En second lieu, le solvant THF valeur de commande est réglée à 100% de viabilité, comme a été ajouté a.......

Discussion

La méthode décrite dans ce manuscrit combine synthèse chimique biologique avec dosage de la viabilité cellulaire. Comme avec toutes les méthodes biologiques concernant les cellules viables, il est essentiel de travailler sous une hotte laminaire, et de maintenir des conditions stériles, y compris l'utilisation de solvants organiques stériles. De plus, la préparation et le stockage de médicaments à base métallique hydrolytiquement instables doivent être effectuées dans des conditions inertes, pour lequel les techniqu.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Réactif/Matériel
Sérum fœtal bovin (FBS)	Biological Industries	04-007-1A
Hexane AR	Gadot	830122313	Séché à l’aide d’un système de séchage par solvant
Lignée cellulaire HT-29	ATCC	HTB-38
Isopropanol AR	Gadot	830111370
L-glutamine	Biological Industries	03-020-1B
MTT	Sigma-Aldrich	M5655-1G
Antibiotiques pénicilline/streptomycine	Biological Industries	03-031-1B
RPMI-1640 avec rouge de phénol avec L-glutamine	Sigma-Aldrich	R8758
RPMI sans rouge de phénol	Biological Industries	01-103-1A
Tétrahydrofurane (THF) AR	Gadot	830156391	séché à l’aide d’un système de séchage par solvant
Ti(OiPr)4	Sigma-Aldrich	205273-500ML	sensible à l’humidité
Trypsine/EDTA	Biological Industries	03-052-1B
VO(OiPr)3	Sigma-Aldrich	404926-10G	humidité sensitive
Equipment
Pipette 12 canaux 30-300 &mu ; l	Thermo Scientific
Pipette 12 canaux 5-50 &mu ; l	Finnpipette
75 cm2 flacon	NUNC	156472
96 puits avec couvercle (fond plat)	NUNC	167008
CO2 Incubateur	Liant	APT.line C150
Chambre de comptoir	Marienfeld-Superior	650030
Eppendorf flacon	KARTELL
Boîte à gants	M. Braun
Hotte à flux laminaire	ADS LAMINAIRE	OPTIMALE 12
Spectrophotomètre lecteur de microplaques	Bio-Tek	El-800
Microscope	Nikon	Eclipse TS100
Pipette 20-200 &mu ; l	Finnpipette
Pipette 5-50 &mu ; l	Finnpipette