Inchworming est un mouvement de creusement synchrone très répétitif affichée par BTBR T + RTI 3TF / J (BTBR) souris lorsqu'il est placé dans une cage de test avec une literie de sciure suffisante. La procédure est une modification du protocole d'interaction sociale des mineurs et est utilisée ici pour évaluer stéréotypies motrices répétitives pertinentes pour troubles du spectre autistique.
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Article de méthode
Inchworming: A Novel moteur Stéréotypie dans le BTBR
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les troubles du spectre autistique (TSA) est un trouble neurologique du développement comportemental défini caractérisé par l'interaction sociale réciproque diminué, communication anormale, et des comportements répétitifs avec intérêt restreint. Comme le diagnostic repose sur des critères cliniques, des modèles de rongeurs potentiellement pertinentes de ce trouble hétérogène devraient idéalement récapituler ces traits comportementaux divers. Le tf BTBR T + Itpr3 / J (BTBR) souris est un modèle animal établi de TSA, affichant des comportements répétitifs tels que l'augmentation de toilettage, ainsi que la rigidité cognitive. En ce qui concerne l'interaction sociale et de l'intérêt, le test de lecture mineur a été utilisée dans plusieurs modèles de rongeurs de TSA. Ici, nous montrons que lorsque les souris BTBR sont testés dans une enceinte de l'interaction sociale des mineurs contenant de la litière de sciure de bois, ils affichent un mouvement de creusement synchrone répétitif. Ce comportement répétitif du moteur, dénommé "inchworming", a été nomméen raison de la nature des mouvements stéréotypés présentées par les souris tout en déplaçant horizontalement dans le sol. Souris Inchworming doivent utiliser leurs membres antérieurs et postérieurs membres en synchronie pour déplacer la literie, l'exécution d'un minimum d'un intérieur et un mouvement vers l'extérieur. Bien que les souris (B6) BTBR C56BL/6J et présentent ce comportement, les souris BTBR démontrent une durée sensiblement plus élevée et la fréquence des inchworming et une diminution du temps de latence pour initier inchworming lorsqu'il est placé dans une enceinte lits. Nous concluons que ce comportement nouvellement décrit fournit une mesure d'une stéréotypie moteur répétitif qui peut être facilement mesurée dans des modèles animaux de TSA.
Introduction
Bien que la physiopathologie des troubles du spectre autistique (TSA) reste incertaine, le diagnostic dépend de la présence de trois grandes catégories de symptômes: la réciprocité sociale anormale, troubles de la communication, et / comportements stéréotypés répétitifs 1. La plupart des modèles de rongeurs sont incapables de reproduire simultanément les trois des symptômes chez un seul animal. Ainsi, les modèles qui peuvent simuler de manière fiable certains ou tous les aspects de la maladie détiennent une grande valeur pour le développement de stratégies préventives et thérapeutiques efficaces. Un modèle qui fait afficher les trois aspects de la TSA est le 1,2 de la souris BTBR.
En combinaison avec les vocalisations ultrasoniques et des tests d'approche sociale, le test d'interaction sociale des mineurs est couramment utilisé pour caractériser des modèles murins de TSA pédiatrique; Ces tests mesurent diminué et les comportements sociaux anormaux qui représentent les caractéristiques fondamentales de TSA. En plus du test d'interaction sociale juvénile, de nombreux autrestests ont été utilisés pour mesurer des comportements stéréotypés dans des modèles animaux de TSA. Par exemple, le test d'enfouissement de marbre, qui examine la tendance d'un animal à déplacer litière utilisant le museau et les pattes avant dans l'effort pour couvrir un objet, est pensé pour mesurer des comportements stéréotypés compulsifs qui se produisent en réponse à des stimuli aversif 3,4. Par conséquent, les tests de creusement ont été mises en œuvre pour quantifier ce comportement répétitif dans des modèles animaux de TSA et différentes espèces de rongeurs 3,5-7. Comportements de creusement sont définies comme des actions dirigées évidentes du museau ou les pattes pour déplacer des matériaux de litière et ont été émis l'hypothèse d'être un paramètre sensible du comportement moteur répétitif 4.
Nous rapportons ici un type de creusement de roman, que nous avons appelé "inchworming," dans la souche BTBR de souris. La caractérisation de ce nouveau problème peut fournir une mesure robuste d'un comportement moteur répétitif qui peut être utilisé pour de plus amples vallidation des modèles de rongeurs tels que les TSA, «la maladie de Huntington ou le comportement obsessionnel-compulsif 8,9. Nous définissons le "inchworming" comme au moins un mouvement synchrone des parties avant et des membres postérieurs vers l'intérieur, suivi par un déplacement synchrone vers l'extérieur, ce qui conduit au déplacement du matériau de litière. Cela diffère de comportement typique de creusement de plusieurs façons. En premier lieu, le comportement inchworming est généralement observée comme une combinaison d'épisodes plutôt qu'un seul événement isolé. En revanche, le trou peut se produire seul mouvement coordonné soit la biche ou pattes antérieures 3. En outre, les mouvements inchworming tendance à se produire à l'horizontale à travers le plancher de l'enceinte, par opposition à des positions fixes qui sont caractéristiques de creuser des comportements. Enfin, le comportement inchworming décrit ci-dessous se produit fréquemment dans la souche pure de souris BTBR mais est rarement identifié dans la souche témoin de B6, tandis que les comportements de creusement typiques sont communs dans les souches B6 et BTBR de souris 10. Les procédures d'essai de inchworming décrites dans cette étude représentent des modifications d'un mineur protocole d'interaction sociale standard 1.
Étant donné que l'enfouissement de marbre, creuser, et le jeu des mineurs ont établi la valeur de mesure de comportement anormal dans des modèles murins de TSA, le comportement de inchworming complète ces mesures précédemment définies de comportements stéréotypés. En particulier, le comportement inchworming fournit une mesure utile de la baisse des stéréotypies motrices de l'ordre qui sont couramment identifiés dans les TSA 8,11. En outre, cette nouvelle procédure de inchworming peut fournir aux chercheurs un outil supplémentaire précieux pour l'analyse des comportements moteurs répétitifs pertinentes à des troubles du développement tels que les TSA.
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Protocole
Toutes les procédures ont été effectuées en accord avec le Comité de protection des animaux du Canada et approuvés par l'Université de Calgary Comité de protection des animaux.
1. Préparation des animaux
- Isoler les souris la nuit (12 h) avant le test. Pour ce faire, placer tous les BTBR et souris B6 (P35-P40) nécessaires à l'analyse expérimentale dans des cages par eux-mêmes, le jour avant le test.
- Placer la souris isolée dans la chambre d'analyse comportementale 30 min avant le test de sorte que les animaux ne s'habituent au nouvel environnement.
2. Préparation du matériel
- Placez les cm en plexiglas 30 x 30 box avec un couvercle amovible dans la salle d'examen. Placer la boîte sur une table et la position de la caméra vidéo à un angle à partir du bas de 45 °; cet endroit de la caméra permettre une visualisation de la totalité du sol de l'enceinte et la souris. Utilisez un éclairage infrarouge pour aider à minimiser les reflets de la paroi dela boîte.
- Utilisez une caméra vidéo qui possède une fonction de zoom élevé avec des capacités infrarouges pour optimiser le tournage dans un environnement de faible lux. Mise au point sur l'enceinte agrandissement de l'image de sorte que les souris sont visualisées à travers la boîte entière.
- Couvrir tout le plancher de la boîte avec de la literie de la sciure de bois (qui devrait être d'environ 1 pouce de profondeur).
3 Procédure de test
- Placer une paire intra-souche de souris (BTBR - BTBR ou B6-B6) à l'intérieur de l'enceinte d'essai.
- Éteignez les lumières dans la salle d'examen.
- Lancer la caméra vidéo pour enregistrer et quitter la salle. Cela permettra d'éviter expérimentateur influence sur le comportement des souris. Enregistrer l'activité de 11 min.
- Une fois l'enregistrement terminé, re-entrer dans la salle d'essai et revenir les souris dans leurs cages à domicile d'origine.
- Disposer de la litière de sciure de bois, laver la zone d'essai entière avec 70% d'éthanol, et placer une nouvelle literie de sciure de bois dans le fond de l'essaienceinte.
- Répétez toute la procédure pour le reste des paires intra-tache et retourner les souris dans leurs cages à domicile d'origine.
Remarque: Pour vérifier la fiabilité des données de inchworming, la procédure peut être répétée les jours suivants avec différents BTBR-BTBR et B6-B6 combinaisons de paires. Cela permettra d'assurer que le comportement observé ne dépend pas de partenaire spécifique dans l'enceinte, mais l'individu inchworming.
4. Analyse des données
- Inchworming est défini comme le mouvement synchrone vers l'intérieur et vers l'extérieur de l'avant-et pattes postérieures de l'animal, avec un minimum d'une co-occurrence vers l'intérieur puis mouvement vers l'extérieur ultérieure qui déplace efficacement la literie. Manuelle regarder et marquer chaque vidéo deux fois (une fois pour chaque souris) afin de déterminer la durée totale, la fréquence et la latence à arpenteuse dans les 10 min vidéo. Manuel de notation inchworming durée, la fréquence et la latence devrait être basé sur le suiviment définitions:
Inchworming Durée: Est défini comme le temps total de chaque souris dépense engagé dans le comportement de inchworming. Pour marquer cet aspect de inchworming, utiliser une minuterie qui peut être démarré et arrêté. Commencer le chronométrage lorsque la souris commence à arpenteuse et arrêter le chronomètre lorsque la souris s'arrête inchworming. Quand et si la souris commence à arpenteuse de nouveau, re-départ et ré-arrêter le chronomètre. Répéter le démarrage et l'arrêt de la minuterie pour la durée de 10 min de la période d'observation chaque fois que les arpenteuses de la souris. Cela va générer un score de durée de inchworming qui est 0:00-10:00 min.
Fréquence Inchworming: est défini comme le nombre de fois que la souris met en prise dans le comportement inchworming dans la période d'observation de 10 min. Un compte unique est attribué à chaque démarrage de la souris et les arrêts inchworming. Le score de fréquence inchworming sera un nombre entre 0 et ∞.
Latence de Inchworm: Est défini comme le temps eau passe avant la première apparition de inchworming. Lancer le chronomètre lorsque la vidéo commence, ce sera le temps de 0:00, et arrêter le chronomètre lorsque les arpenteuses de la souris pour la première fois. Si la souris ne s'affiche pas le comportement inchworming la latence à arpenteuse sera 10h00. Lors de l'analyse de latence à arpenteuse, un score 0:01-10:00 min sera obtenu. Les souris qui ne arpenteuse pendant la durée de la période de test doivent être retirés de la population de l'échantillon afin de s'assurer que les résultats sont pertinents pour une population de souris qui présentent le comportement de inchworming. - Calcul de la fréquence et de la durée totale de inchworming pour chaque souris dans la vidéo. Calculer le temps nécessaire pour la première souris dans la paire de chenille arpenteuse de la latence à arpenteuse pour cette paire spécifique de la souris. Ces paramètres sont basés sur le travail méthodologique préalable liée à des comportements de creusement répétitives chez la souris 6.
- Calculer la durée moyenne, la fréquence,et la latence de creuser pour chaque groupe expérimental dans l'analyse (par exemple BTBR vs B6). Utilisez une analyse de variance ou un test t de comparer les données entre les souches / groupes expérimentaux.
Remarque: Lorsque la procédure est terminée sur une deuxième journée, utilisez une ANOVA à mesures répétées pour s'assurer qu'il n'y avait pas d'effets procès ultérieurs ou des effets d'appariement.
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Résultats
La version modifiée du test de lecture mineur décrit ici peut être utilisé pour observer et analyser le comportement de creusement répétitif roman appelé inchworming. Inchworming est exposée à une plus grande mesure par les souris BTBR que les contrôles B6. Dans une session typique de 10 min, les souris BTBR affichera le comportement de inchworming distincte (synchrone vers l'intérieur et vers l'extérieur mouvement des pattes dans un effort pour déplacer la litière de sciure de bois) pendant environ 5 minutes, s...
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Discussion
Inchworming est un roman mesure du comportement répétitif qui peut être utilisée pour étudier de nombreux troubles qui présentent des stéréotypies tels que les TSA. Il ya 4 étapes qui sont d'une importance cruciale pour générer des données de inchworming fiables du protocole d'interaction sociale des mineurs modifié: 1) la période d'isolement prolongé est essentiel à l'épreuve de inchworming et ne doit pas être retiré du protocole ou raccourcie. Cette exigence est spécifique aux tests de inchworming en p...
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n'ont rien à révéler.
Remerciements
Les auteurs sont reconnaissants pour l'assistance technique et logistique et l'expertise fournie par Rose Tobias, Younghee Ahn et David N. Ruskin. Le travail décrit ici a été financé par la Fondation Hôpital de l'Alberta Children et l'Institut de recherche en santé de l'Alberta Children.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Boîte en plexiglas de 30 cm x 30 cm avec couvercle | Peut être construit | ||
| Caméra IR | Survshop (Calgary, Alberta) | Caméra CCD Sony DP955V- 30’ ; Dôme d’armure infrarouge | Trouvez une caméra avec des capacités de haute résolution et de zoom |
| Supercircuits DVR | (Austin, Texas) | NOIR DVR de sécurité H.264 4 canaux de classe entreprise avec graveur de DVD Capacité | de données élevée |
| Sciure de bois | Identique au matériau de la literie |
Références
- McFarlane, H. G., Kusek, G. K., Yan, M., Phoenix, J. L., Bolivar, V. J., Crawley, J. N. Autism-like behavioral phenotypes in BTBR T+tf/J mice. Genes, Brain, and Behavior. 7, 152-163 (2008).
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- Deacon, R. Digging and marble burying in mice: simple methods for in vivo identification of biological impacts. Nature Protocols. 1 (1), 122-124 (2006).
- Thomas, A., Burant, A., Bui, N., Graham, D., Yuva-Paylor, L. A., Paylor, R. Marble burying reflects a repetitive and perseverative behavior more than novelty-induced anxiety. Psychopharmacology. 204, 361-373 (2009).
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