Méthodes pour étudier les mécanismes d&#39;action des antipsychotiques dans<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Résumé

Approches pour tester les effets des médicaments antipsychotiques (APDS) dans Caenorhabditis elegans sont démontrés. Les dosages sont décrits pour tester les effets des médicaments sur le développement et sur la viabilité et le taux de pompage du pharynx. Ces méthodes sont également applicables pour les expériences pharmacogénétiques avec d'autres classes de médicaments que les PDA.

Résumé

Caenorhabditis elegans est un organisme génétique simple prêtent à grande échelle avant et arrière écrans génétiques et les écrans génétiques chimiques. Le C. génome elegans comprend médicament antipsychotique potentiel (APD) des cibles conservées chez l'homme, y compris les gènes codant pour des protéines nécessaires à la synthèse des neurotransmetteurs et pour la structure et la fonction synaptique. Exposition APD produit retard et / ou la létalité chez les nématodes de développement d'une manière dépendante de la concentration. Ces phénotypes sont dus, en partie, par l'inhibition induite APD de ^1,2 pharyngée pompage. Ainsi, le phénotype de développement a une base neuromusculaire, ce qui est utile pour des études pharmacogénétiques des neuroleptiques. Ici, nous démontrons des procédures détaillées pour tester les effets APD sur le développement des nématodes et du pharynx pompage. Pour le dosage du développement, les embryons sont placés synchronisés sur un milieu de croissance de nématodes (NGM) des plaques contenant APDs, et les stades de développement de l'anusmaux sont ensuite marqués quotidien. Pour le test de débit de pompage du pharynx, mis en scène de jeunes animaux adultes sont testés sur des plaques NGM contenant APD. Le nombre de pompes du pharynx par unité de temps est enregistré, et le débit de pompage est calculé. Ces dosages peuvent être utilisés pour l'étude de nombreux autres types de petites molécules ou même de grandes molécules.

Introduction

Caenorhabditis elegans est un organisme génétique simple prêtent à grande échelle écrans génétiques avant et arrière et des écrans génétiques chimiques. C. elegans est sensible à un large spectre de composés bioactifs et a donc été utilisée avec succès pour déterminer les mécanismes d'action de ces divers composés. Par exemple, les composés bioactifs étudiés en utilisant la pharmacogénétique à vis sans fin comprennent des agonistes des récepteurs de l'acétylcholine (par exemple, lévamisole, la nicotine, morantel, et pyrantel), anesthésiques (par exemple, l'halothane), la caféine, les inhibiteurs de cholinestérase (p....

Protocole

Une. Retard de développement / test de létalité: Le type sauvage (N2) et deux souches mutantes (MUT1 et Mut2) sont testés dans trois concentrations de clozapine dans une plaque de 12 puits

1. Au jour 1, verser 2 ml NGM support ¹⁰ dans chaque puits d'une plaque de 12 puits (chaque puits d'un diamètre de 2 cm) et laisser durcir sur le banc à la température ambiante (RT) pendant la nuit. Le même jour, choisir une colonie de bactéries Escherichia coli OP50, infecter une bouteille de 50 ml de solution LB, et de la culture dans un shaker 37 ° C à 220 rpm rotation pendant la nuit.
2. Le jour 2, transférer 20 cultu....

Résultats

Une. Le retard de développement / résultat du test de létalité

Un résultat typique pour le dosage de retard / de létalité de développement est mise en évidence sur les figures 1a et 1b. Lorsque les animaux sauvages dans le groupe de contrôle ont grandi à l'âge adulte gravide (figure 1a), les animaux de type sauvage exposées à la clozapine sont encore dans les jeunes stades larvaires ou sont morts (figure 1b). Figure 1c mont.......

Discussion

Ici, nous décrivons les méthodes pour tester les effets des APD sur le développement et le comportement de C. elegans. DMSO ou de l'éthanol est utilisé pour dissoudre la clozapine, étant donné que le médicament est relativement insoluble dans l'eau. Parce que les solvants ont été signalés à affecter C. elegans biologie ^12, le DMSO seul ou groupes de contrôle éthanol seul sont essentiels. La plus forte concentration de DMSO utilisés dans nos essais est jusqu'à 3%, qui n'a pas .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Clozapine	Sigma	C6305
Diméthylsulfoxyde (DMSO)	Sigma	D8418
Acide acétique (HAC)	Fisher	BP2401
Hydroxyde de sodium (NaOH)	EMD	SX0590-13
Hypochlorite	Sigma-Aldrich	425044
Centrifugeuse 5810	Eppendorf	5810 000.017
Agitateur d’incubateur	New Brunswick Scientific	M1246-0006
Incubateur à basse température 815	Precision Scientific	J1790-1B
Stéréomicroscope	Olympus	SZX12
Boîte de Pétri 35 x 10 mm	Fisher Scientific	NC9434271
12 puits Plaque de culture tissulaire	BD Falcon	REF 353043