Dans la migration cellulaire in vitro et Invasion dosages

Résumé

Couramment utilisés, des méthodes très accessibles pour examiner la migration cellulaire et l'invasion in vitro sont décrits. La première méthode est la fermeture de la plaie dosage de cellules qui mesure la motilité cellulaire. La deuxième méthode est la migration et l'invasion essai transwell qui évalue la capacité chimiotactique et invasif des cellules.

Résumé

La migration est une propriété clé des cellules vivantes et essentielle au développement normal, à la réponse immunitaire et aux processus pathologiques tels que les métastases cancéreuses et l’inflammation. Les méthodes d’examen de la migration cellulaire sont très utiles et importantes pour un large éventail de recherches biomédicales telles que la biologie du cancer, l’immunologie, la biologie vasculaire, la biologie cellulaire et la biologie du développement. Ici, nous utilisons la migration et l’invasion des cellules tumorales comme exemple et décrivons deux tests connexes pour illustrer les méthodes couramment utilisées et facilement accessibles pour mesurer ces processus. La première méthode est le test de fermeture de la plaie par culture cellulaire dans lequel une égratignure est générée sur une monocouche cellulaire confluente. La vitesse de fermeture de la plaie et de migration cellulaire peut être quantifiée en prenant des photos instantanées avec un microscope inversé régulier à plusieurs intervalles de temps. Le comportement migratoire cellulaire plus détaillé peut être documenté à l’aide du système de microscopie time-lapse. La deuxième méthode décrite dans cet article est le test de migration et d’invasion cellulaire transwell qui mesure la capacité de motilité cellulaire et d’invasivité envers un gradient chimio-attractif. Notre objectif est de décrire ces méthodes d’une manière très accessible afin que les procédures puissent être réalisées avec succès dans les laboratoires de recherche, même avec une configuration de base en biologie cellulaire.

Introduction

La motilité est une caractéristique essentielle de cellules vivantes. La migration cellulaire est impliquée dans la conception de la vie, le développement embryonnaire, la réponse immunitaire, et de nombreux processus pathologiques, tels que les métastases du cancer et l'inflammation ^9.1. Par conséquent, les méthodes pour étudier le comportement migratoire cellule sont des outils de recherche très utiles pour un large éventail de disciplines en sciences biomédicales, biologie, bio-ingénierie, et des domaines connexes.

L'étude de la migration cellulaire dans la recherche sur le cancer est d'un intérêt particulier com....

Protocole

1. Culture cellulaire fermeture de la plaie Assay

1. Détacher les cellules de la plaque de culture de tissu en utilisant 0,25% de solution de trypsine-EDTA. cellules à granules dans un tube conique de 15 ml par centrifugation, aspirer le surnageant et les cellules dans un milieu de culture re-suspension. Plate le nombre approprié de cellules dans une plaque à 6 puits à 100% de confluence dans les 24 heures.
   Remarque: Les essais peuvent être nécessaires pour déterminer le moment et le nombre de cellules d'atteindre 100% de confluence en raison du type de cellule et de la taille de l'être bien utilisée (par exemple, 1 x 10 ⁶ cellules B....

Résultats

L'essai de fermeture de plaie et la détermination de la migration cellulaire Transwell présentées ici ont été effectuées en utilisant des cellules de souris B16F10 de mélanome comme un système modèle. Dans l'essai de fermeture de plaie, B16F10 cellules ont été ensemencées dans une plaque de culture tissulaire à 6 puits et cultivées jusqu'à 100% de confluence dans les 24 heures. Une plaie d'environ 700 um de large a été générée à l'aide d'une pointe de pipette et la fermeture de la plaie (migratio.......

Discussion

La migration cellulaire est un aspect important d'étudier en recherche sur le cancer et il peut également être appliquée à des études de guérison de développement, immunologiques et la plaie. La culture cellulaire enroulé essai de fermeture et la migration des cellules transwell et invasion tests révèlent des informations détaillées sur les comportements migratoires des cellules et peut être utilisée pour étudier les mécanismes moléculaires de la migration des cellules ^1,2,10,14. Notre étude a utilisé ces.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Dulbecco' s milieu Eagle modifié (DMEM)	Gibco	11995-073
Sérum fœtal bovin (FBS)	Gemini	100106
Albumine sérique bovine (BSA)	Sigma-Aldrich	A4503-50G
Trypsine EDTA 0,25 %	Gibco	25200-056
Dulbecco' s solution saline tamponnée au phosphate (DPBS)	Gibco	14190-250
Violet cristallin	Sigma	C0775-100G	Dissous dans l’eau à 0,2 %
Tampon de dissociation cellulaire	Gibco	13151-014
Incubateur de culture cellulaire	Thermo Fisher Scientific		Model # 3145
Capot de biosécurité SterilGARD	The Baker Company, Inc.  ;		Modèle # VBM-600
EVOS Fl microscope inversé	Thermo Fisher Scientific		Modèle # AMF-4302-US
Plaque de culture tissulaire	Becton Dickinson	353046	Le numéro de catalogue varie en fonction du type de plaque de culture
Corning Transwell insert	Fisher	07-200-150	Le numéro de catalogue varie en fonction de la taille des pores de la membrane