Une méthode améliorée pour la mesure précise et rapide des performances de vol en Drosophila

Daniel T. Babcock; Barry Ganetzky

doi:10.3791/51223

Article de méthode

Une méthode améliorée pour la mesure précise et rapide des performances de vol en Drosophila

DOI :

10.3791/51223

⸱

13 février 2014

Daniel T. Babcock¹ , Barry Ganetzky¹

¹Department of Genetics, University of Wisconsin-Madison

Dans cet article

Résumé

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Nous décrivons ici une méthode de mesure rapide et précise des performances de vol chez la drosophile, permettant le criblage à haut débit.

Résumé

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Drosophila s'est avéré être un système de modèle utile pour l'analyse du comportement, y compris le vol. Le testeur de vol chute impliqué initiale vole dans une huile revêtu graduée; hauteur d'atterrissage a permis de mesurer les performances de vol en évaluant comment les mouches loin tomberont avant de produire une poussée suffisante pour prendre contact avec la paroi du cylindre. Nous décrivons ici une version mise à jour de l'appareil de contrôle de vol avec quatre améliorations majeures. Tout d'abord, nous avons ajouté un "tube de descente" de veiller à ce que toutes les mouches entrent dans le cylindre de vol à une vitesse similaire entre les essais, ce qui élimine la variabilité entre les utilisateurs. Deuxièmement, nous avons remplacé le revêtement de l'huile de feuilles de plastique amovibles revêtus de Tangle-Trap, un adhésif conçu pour capturer des insectes vivants. Troisièmement, nous utilisons un cylindre plus de permettre la discrimination plus précise de la capacité de vol. Quatrième nous utilisons un appareil photo numérique et des logiciels d'imagerie pour automatiser la notation des performances de vol. Ces améliorations permettent de rapIdentifiant, l'évaluation quantitative du comportement de vol, utile pour les grands ensembles de données et les écrans génétiques à grande échelle.

Introduction

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Drosophila a longtemps été utilisée pour étudier la base génétique du comportement ^1, et les chercheurs ont mis au point un certain nombre de façons d'analyser différents types de comportements ^2-6. Les mouches ont été particulièrement utiles pour fournir des modèles utiles de troubles neuromusculaires ^7. Un test couramment utilisé pour étudier le comportement locomoteur des performances de vol. Le testeur de vol initial est utile pour identifier les ponts mutants défectueux et pour l'évaluation quantitative de la capacité de vol ^1, mais il a plusieurs inconvénients qui limitent son application pour les écr....

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Protocole

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Une. Assembler Vol testeur

Vol sécurisé cylindre Ring Stand 1 aide de colliers de chaîne. (Laissez environ 3 cm en dessous du cylindre pour peser plat.)
(Note: Le cylindre de vol, nous utilisons est de 90 cm de long avec un diamètre de 13,5 cm.)
Insérez peser plat avec une fine couche d'huile minérale sous le cylindre de vol.
Entonnoir sécurisé Ring Support 2 en utilisant un collier de serrage et griffe pince. Ajuster la hauteur de l'entonnoir de sorte que le fond de l'entonnoir est de niveau avec la partie supérieure du cylindre de vol. (Note: le diamètre de l'entonnoir d'extrémité doit être inférieur au diam....

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Résultats

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La figure 1A montre un schéma de l'ensemble de testeur de vol mis à jour. Figure 1B illustre la conception de la voie permettre à l'appareil de prendre une image panoramique sans bloquer le champ de vision. Les résultats représentatifs sont présentés dans la figure 2, où les performances de vol de mouches mutantes slowpoke, qui ont un vol défaut ^8-10 connu, sont comparées au type sauvage Canton-S vole. Contrôle vole toujours atterrir près du.......

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Discussion

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En utilisant les méthodes décrites ici, nous avons été en mesure d'évaluer rapidement les performances de vol d'un grand nombre de mutants de drosophile, offrant une plus grande efficacité qu'auparavant. Pour nos expériences, nous nous séparons systématiquement hommes et les femmes et les élever à faible densité (moins de 20 mouches / flacon) pour limiter l'agression qui pourrait endommager les ailes. Une autre considération importante est de bien contrôler les différences de performances de vol.......

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Déclarations de divulgation

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Les auteurs n'ont aucun conflit d'intérêt à divulguer.

Remerciements

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Ce travail a été soutenu par les Instituts nationaux de la santé accorde F32 NS078958 (DTB) et R01 AG033620 (BG).

....

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Couteau à mastic	Home Depot	630147	www.homedepot.com
Moulure à bande arrière en pin (2x)	Home Depot	156469	www.homedepot.com
Planche de fourrure	Home Depot	164704	www.homedepot.com
Tangle-Trap Insect Trap Coating BioControl	Network	268941	www.biconet.com
Ordinateur portable ;	Apple		www.apple.com/mac/
Huile minérale	Fisher Scientific	BP26291	www.fishersci.com
Panneau d’affichage blanc	Staples	247403	www.staples.com
Plat de pesée en polystyrène	Fisher Scientific	S67091A	www.fishersci.com
ImageJ Software	National Institutes of Health		http://rsb.info.nih.gov/ij/
Appareil photo numérique	Sony	DSC-TX7	www.store.sony.com
Pince fine	Fine Science Tools		www.finescience.com
Cylindre en polycarbonate (tube de descente)	McMaster-Carr	8585K62	www.mcmaster.com
Cylindre de vol (acrylique)	McMaster-Carr	8486K943	www.mcmaster.com
Feuilles polycarbonate	McMaster-Carr	85585K25	www.mcmaster.com
support d’anneau (2x)	Fisher Scientific	S47808	www.fishersci.com
Support d’anneau	Fisher Scientific	S47791	www.fishersci.com
Pinces d’extension à trois broches (x2)	Fisher Scientific	05-769-7Q	www.fishersci.com
Entonnoir	Fisher Scientific	10-500-3	www.fishersci.com
pinces de chaîne (2x)	VWR	21573-275	www.vwr.com
Flacons en verre	VWR	66020-198	www.vwr.com

Références

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Benzer, S. Genetic dissection of behavior. Sci. Am. 229, 24-37 (1973).
Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration. J. Vis. Exp. , e2504(2011).
de Vries, S. E., Clandinin, T.

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Mots-clés

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