Une peau pleine de défauts modèle pour évaluer la vascularisation des biomatériaux In Vivo

Résumé

La vascularisation est la clé pour les approches en ingénierie tissulaire succès. Par conséquent, des technologies fiables sont nécessaires pour évaluer le développement des réseaux vasculaires dans les tissus-constructions. Nous présentons ici une méthode simple et efficace de visualiser et de quantifier la vascularisation in vivo.

Résumé

Vascularisation insuffisante est considéré comme l'un des facteurs principaux limitant le succès clinique de constructions du génie tissulaire. Afin d'évaluer de nouvelles stratégies visant à améliorer la vascularisation, méthodes fiables sont nécessaires pour rendre le dans la croissance de nouveaux vaisseaux sanguins dans les échafaudages de bio-artificiel visibles et quantifier les résultats. Au cours des deux dernières années, notre groupe a mis en place un modèle de défaut de peau complet qui permet la visualisation directe des vaisseaux sanguins par transillumination et offre la possibilité de quantification par la segmentation numérique. Dans ce modèle, on crée chirurgicalement défauts complets de la peau dans le dos de souris et les remplace par du matériau testé. Molécules ou cellules d'intérêt peuvent aussi être incorporés dans ces matières à étudier leur effet potentiel. Après un temps d'observation de son choix un, les matériaux sont explantées pour l'évaluation. Blessures bilatéraux prévoient la possibilité de faire des comparaisons internes eà minimiser les artefacts entre les individus ainsi que de diminuer le nombre d'animaux nécessaires à l'étude. En comparaison à d'autres approches, notre méthode offre une analyse simple, fiable et rentable. Nous avons mis en place ce modèle comme un outil de routine pour effectuer le criblage à haute résolution lors du test de la vascularisation de différents biomatériaux et les approches bio-activation.

Introduction

Dans les dernières décennies, l'ingénierie tissulaire a ouvert une nouvelle option thérapeutique pour remplacer défauts des tissus avec les propres cellules de l'organisme ^1. Afin de soutenir le processus physiologique de la régénération des tissus, des échafaudages sont conçus comme une structure biodégradable, qui fournit un scénario où les cellules du lit de la plaie peuvent se développer et de rétablir le défaut ^2,3.

Vascularisation insuffisante est considéré comme le principal obstacle qui freine la percée clinique d'échafaudages bioartificiel ^4. Avec la croissance de cellules, la demande ....

Protocole

1 Préparation des échafaudages

1. Générer des échantillons des échafaudages en utilisant 12 mm de poinçons de biopsie.
2. Pour introduire des molécules bioactives ou des cellules dans l'échafaud, égoutter les échafaudages en les pressant doucement avec une gaze stérile. Puis réhydrater les échafaudages en ajoutant 160 ul d'une solution contenant des molécules ou des cellules d'intérêt bioactifs. Double-vérifier le succès de bioactivation avec des cellules par des tests métaboliques tels que le MTT dosages.
3. Si nécessaire, fixer les composés ou les cellules à tester à l'intérieur de l'échafaudage, en les délivrant, par exemp....

Résultats

A défaut fiable pleine peau bilatérale peut être créé chez la souris (Figure 1) où la peau peut être remplacé par un biomatériau à l'étude (Figure 2). Ici, pas de complications majeures sont observées pendant ou après l'intervention chirurgicale, ni signes macroscopiques d'infection ou de réaction à corps étranger. Dans de rares cas, un échafaudage se perd lorsque la souris le supprime. La contraction des plaies n'a jamais été observée (figure 3). transillumination de t.......

Discussion

Il est nécessaire d'établir des méthodes efficaces dans l'amélioration de la perfusion sanguine dans les constructions de l'ingénierie tissulaire, qui exige la mise au point de nouvelles méthodes fiables pour étudier les processus de vascularisation dans les biomatériaux. Les méthodes courantes pour faire échafaud vascularisation ex vivo visible comprennent l'utilisation de la microscopie, qui fournit un outil de haute résolution. Dans la plupart des cas, cependant, cette méthode est limitée à l.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Ethilon P-3 13 mm 3/8 cercle 5-0	Ethicon, Norderstedt, Allemagne	698G	Ethilon polyamid-6 point de précision coupe inversée
poinçons de biopsie (10 mm)	Xiomedics, Acuderm inc., Fort Lauderdale, FL, USA	P1050
Poinçons de biopsie (12 mm)	Xiomedics, Acuderm inc., Fort Lauderdale, FL, USA	P1250
Appareil photo numérique  ;	Ricoh, Hanovre, Allemagne	Cx1
Gazin Mullkompresse  ;	Lohmann und Rauscher, Neuwied, Allemagne	13622	Gaze stérile (10 cm x 10 cm)
Échafaudage à double couche à base de collagène (8' x 10')	Integra Life Science Corporation, Plainsboro, NJ, USA	88101
Isoflurane, gaz liquide pour anesthésie inhalative  ;	Baxter, Unterschleissheim, Allemagne	100196040
Pentobarbital, 16 g / 100 ml	Fa. Merial, Hallbergmoos
Nuri Nu/Nu Nude souris, CrLNU-Foxn1nu	Charles River, Sulzfeld, Allemagne	Code de souche 088	Souris nude athymiques, âgées de 6 à 8 semaines et dont le poids corporel est compris entre 20 et 25 g  ;
Buprénorphine (0,3 mg/ml)	Essex Pharma GmbH, Munich, Allemagne
Maille titanisée (15 cm x 15 cm), extralégère	PFM Medical AG, Kö ; ln, Allemagne	6000029
Tissucol Duo S Immuno 2 ml	Baxter Germany GmbH, Unterschleiß ; heim, Allemagne	B1332020110614	solution de fibrine-thrombine  ;
Champ adhésif transparent (30,5 cm x 26 cm)	KCI Medical Products, Wimborne Dorset, Royaume-Uni	M6275009/10