Une méthode pour générer pulmonaire Neutrophilie Utilisation Aerosolized lipopolysaccharide

Résumé

Nous décrivons une méthode pour induire une inflammation pulmonaire neutrophile par défi pour lipopolysaccharide aérosol par nébulisation, pour modéliser une lésion pulmonaire aiguë. En outre, des techniques chirurgicales de base pour l'isolement du poumon, l'intubation endotrachéale et lavage broncho-alvéolaire sont également décrits.

Résumé

Lésion pulmonaire aiguë (ALI) est une maladie grave caractérisée par neutrophilie alvéolaire, avec des options de traitement limitées et une mortalité élevée. Des modèles expérimentaux de ALI sont clé dans l'amélioration de notre compréhension de la pathogenèse de la maladie. Le lipopolysaccharide (LPS) provenant de bactéries à gram positif induit une inflammation neutrophile dans les voies respiratoires et du parenchyme pulmonaire de la souris. Délivrance pulmonaire efficace des composés tels que le LPS est toutefois difficile à réaliser. Dans l'approche décrite ici, l'administration pulmonaire chez la souris est réalisé par défi pour aérosol Pseudomonas aeruginosa LPS. LPS a été dissous en aérosol par un nébuliseur relié à air comprimé. Les souris ont été exposées à un flux continu d'aérosol de LPS dans une boîte en plexiglas pendant 10 minutes, puis 2 min après le conditionnement aérosol a été abandonnée. L'intubation endotrachéale et lavage broncho-alvéolaire subséquente, suivi par une perfusion de formol a été prochain effectuées, ce qui permet la caractérisation de la p stérileulmonary inflammation. LPS en aérosol génère une inflammation pulmonaire alvéolaire caractérisé par neutrophilie, détecté dans le lavage broncho-alvéolaire et par évaluation histologique. Cette technique peut être mis en place à un faible coût avec quelques appareils, et exige une formation et une expertise minimale. Le système d'exposition peut donc être effectuée systématiquement dans tout laboratoire, avec le potentiel d'améliorer notre compréhension de la pathologie pulmonaire.

Introduction

Le lipopolysaccharide (LPS) est un composant de la paroi cellulaire de bactéries à Gram négatif ^1. Défi au LPS est un modèle bien documenté de lésion pulmonaire aiguë, un syndrome caractérisé par une inflammation neutrophile aiguë et un oedème ^2. En outre, neutrophilie pulmonaire est également une caractéristique de la maladie pulmonaire obstructive chronique (MPOC) ^3, et le défi LPS chez l'homme a été utilisé pour modéliser exacerbations de la MPOC ^4. Ainsi, les modèles expérimentaux d'exposition LPS sont des outils pertinents et utiles pour comprendre la pathologie humaine cliniquement.

Protocole

Les études chez l'animal ont été approuvés par le comité d'éthique de bien-être animal du Nord de Stockholm. Les procédures expérimentales ont été effectuées en conformité avec la législation suédoise.

1. Génération d'un aérosol LPS

1. Dissoudre 0,5 g purifiée P. aeruginosa LPS dans 50 ml de solution saline stérile avec agitation douce et vérifier dissolution. Diluer 1 ml de LPS en solution dans 9 ml de solution saline stérile, à une concentration finale de 1 mg / ml. Protéger de la lumière avec une feuille d'aluminium et conserver à -20 ° C.
2. Décongeler LPS solubilisées dans l'obscurité à la température ambiante....

Résultats

Défi d'aérosol P. aeruginosa LPS donne généralement une réponse inflammatoire marqué dans la lumière des voies aériennes et de l'espace alvéolaire, caractérisé par une prédominance de neutrophiles aux deux points de temps précoces et tardifs.

Aérosol LPS induit neutrophilie pulmonaire

Souris C57BL / 6BY et BALB / c ont été exposées à des aérosols P. aeruginosa LPS ou du véhicule et les neutrophiles ont été dénombrées dans BALF. Le nombre total de c.......

Discussion

LPS en aérosol génère une réponse inflammatoire dans les voies respiratoires, caractérisé par des neutrophiles dans la muqueuse epitheliale, les espaces entourant les voies respiratoires conductrices, ainsi que les espaces alvéolaires. Ce est, avec la teneur en protéines totales ont augmenté dans BALF, indicatif de fuite plasmatique, représentant de la pathologie de la lésion pulmonaire aiguë. Comme LPS induit une inflammation stérile, la réaction est indépendante de la réponse immunitaire adaptative, et il existe des l.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Purifié Pseudomonas aeruginosa LPS	Sigma-Aldrich		Nocif. Purification recommandée. On peut utiliser du LPS purifié à partir d’autres bactries.
Nébuliseur étoile Pari LC sprint	PARI Respiratory Equipment Inc.	023G1250
TSI Débitmètre massique 4040	TSI	4040	Un produit alternatif du fournisseur peut être utilisé.
Tube Tygon Saint-Gobain 15,9 mm	Sigma-Aldrich	Z685704	marque recommandée.
Boîtes en plexiglas avec couvercles amovibles	Fabriquées sur mesure	N/A	150 x 163 x 205 mm (un trou de 2 mm sur le côté).  ;
3M demi-masque respiratoire réutilisable	3M	7503	Marque recommandée.
Filtres à particules avancés 3M (P100)  ;	3M	2291	Marque recommandée.
Ciseaux	VWR	233-1104	Il est préférable d’utiliser des ciseaux.
Pince	VWR	232-1313	Il est préférable d’utiliser une pince.
Tube en polyéthylène Intramedic PE50	BD	427411	Marque recommandée.
Ethicon 2-0 Bande de roulement en soie Perma-hand	VWR	95056-992	Marque recommandée.
26 ½ ; aiguille de jauge	Il existe d’autres
Seringue à embout coulissant BD de 1 ml, non stérile