qPCR est une méthode sensible et rapide pour la détection de l&#39;ADN cytomégalovirus dans la formaline fixe, inclus dans la paraffine des tissus de biopsie

Morgan H. McCoy; Kristin Post; Joyashree D. Sen; Hsim Y. Chang; Zijin Zhao; Rong Fan; Shaoxiong Chen; Diane Leland; Liang Cheng; Jingmei Lin

doi:10.3791/51570

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Article de méthode

qPCR est une méthode sensible et rapide pour la détection de l'ADN cytomégalovirus dans la formaline fixe, inclus dans la paraffine des tissus de biopsie

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DOI :

10.3791/51570

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9 juillet 2014

Morgan H. McCoy¹ , Kristin Post² , Joyashree D. Sen² , Hsim Y. Chang² , Zijin Zhao¹ , Rong Fan¹ , Shaoxiong Chen¹ , Diane Leland¹ , Liang Cheng¹ , Jingmei Lin¹

¹Department of Pathology and Laboratory Medicine, Indiana University School of Medicine, ²Department of Pathology and Laboratory Medicine, Indiana University Health

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit la détection par qPCR du cytomégalovirus dans le tissu de biopsie fixé au formol et inclus dans la paraffine, qui est rapide, sensible, spécifique et utile pour interpréter les modèles équivoques d’hématoxyline et d’éosine ou de coloration immunohistochimique.

Résumé

Il est essentiel d'identifier le cytomégalovirus (CMV) dans le tractus gastro-intestinal (GI) chez les patients immunodéprimés, compte tenu de leur plus grand risque de développer une infection grave. Beaucoup de méthodes de laboratoire pour la détection de l'infection à CMV ont été développés, notamment la sérologie, culture virale, et des méthodes moléculaires. Souvent, ces méthodes reflètent une atteinte systémique par le CMV et ne permettent pas d'identifier précisément l'implication du tissu local. Par conséquent, la détection de l'infection par le CMV dans le tractus gastro-intestinal est souvent fait en histologie classique de tissu de biopsie. Hématoxyline et l'éosine (H & E) coloration en conjonction avec l'immunohistochimie (IHC) sont restés les piliers de l'examen de ces biopsies. H & E et IHC entraînent parfois des atypiques (équivoques) motifs de coloration, ce qui rend l'interprétation difficile. Il a été montré que la polymerase chain reaction quantitative (qPCR) pour le CMV peut être exécutée avec succès sur, les tissus de biopsie inclus dans la paraffine (FFPE) fixés au formol pour les trèshaute sensibilité et spécificité. L'objectif de ce protocole est de démontrer comment effectuer les essais qPCR pour la détection du CMV dans FFPE tissu de biopsie dans un laboratoire clinique. Cette méthode est susceptible d'être d'une grande utilité pour les patients en cas de coloration équivoque pour le CMV dans des biopsies de GI.

Introduction

Interprétation du cytomégalovirus (CMV) dans les échantillons cliniques est très important. Le CMV est un membre de la sous-famille des herpesvirus Betaherpesvirinae. Semblable à d'autres virus de l'herpès, le CMV a la capacité d'établir une infection persistante ou latente caractérisé par un manque de réplication virale active ^1. Réactivation du virus peut se produire pendant les périodes de stress ou autre immunosuppression, conduisant à une réplication virale active caractérisée par virion de presse, qui peut être accompagné par des manifestations de la maladie ^2-4. Gastro-intestinal (GI) symptômes de la maladie à CMV comprennent ....