Transplantation de queue peau d'étudier allogéniques CD4 réponses des cellules T chez la souris

Résumé

La greffe de peau de queue est un modèle puissant pour étudier le rejet dépendant des lymphocytes T et l’induction de la tolérance au cours des réponses immunitaires allogéniques chez la souris. Les avantages de ce protocole sont la chirurgie invasive mineure et la facilité de surveillance sans qu’il soit nécessaire de sacrifier la souris receveuse.

Résumé

L’étude des réponses des lymphocytes T et de leurs conséquences lors de la reconnaissance d’allo-antigènes nécessite un modèle qui permette de distinguer les lymphocytes T donneurs et hôtes, de suivre facilement le greffon et d’adapter le système afin de répondre à différentes questions immunologiques. Medawar et ses collègues ont établi la greffe allogénique de peau de queue chez la souris en 1955. Depuis, le modèle de greffe de peau n’a cessé d’être modifié et adapté pour répondre à des questions spécifiques. L’utilisation de la peau de la queue rend ce modèle facile à marquer pour le rejet du greffon, ne nécessite ni préparation approfondie ni anesthésie profonde, est applicable aux animaux de tous les antécédents génétiques, décourage la nécrose ischémique et permet une intervention chimique et biologique.

En général, les lymphocytes T allogéniques CD4⁺ et CD8⁺ sont responsables du rejet des allogreffes car ils reconnaissent les antigènes majeurs d’histocompatibilité non appariés de différentes souches de souris. Plusieurs modèles ont été décrits pour activer les lymphocytes T allogéniques chez des souris transplantées de peau. L’identification de molécules du complexe majeur d’histocompatibilité (CMH) de classe I et II dans différentes souches de souris, y compris les souris C57BL/6, a été une étape importante vers la compréhension et l’étude des alloréponses médiées par les lymphocytes T. Dans le modèle de transplantation de peau de queue décrit ici, une mutation en trois points (I-A^bm12) dans le sillon de présentation de l’antigène de la molécule du CMH de classe II (I-A^B) est suffisante pour induire une forte activation allogénique des lymphocytes T CD4⁺ chez les souris C57BL/6. Les greffes de peau de souris I-A^bm12 sur des souris C57BL/6 sont rejetées dans un délai de 12 à 15 jours, tandis que les greffes syngéniques sont acceptées jusqu’à 100 jours. L’absence de lymphocytes T (souris CD3^-/- et Rag2^-/-) permet l’acceptation de la greffe de peau jusqu’à 100 jours, ce qui peut être surmonté par le transfert de 2 x 10⁴ lymphocytes T de type sauvage ou transgéniques. Les lymphocytes T transférés par adoption prolifèrent et produisent de l’IFN-γ chez les souris Rag2^-/- transplantées I-A^bm12.

Introduction

La transplantation d'organes solides tels que la peau, le cœur et les reins est maintenant une procédure standard dans la pratique médicale dans le monde entier ^1. Organes transplantés avec succès peuvent être rejetés par l'activation du système immunitaire receveur, qui reconnaît les antigènes majeurs d'histocompatibilité du donneur. Patients transplantés donc besoin d'un traitement avec des médicaments immunosuppresseurs ^2. Allogreffe de peau chez la souris a été créé par Medawar et ses collègues en 1955 et a été utile pour identifier les molécules ciblées plus tard décrit comme complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) de....

Protocole

Dans cette publication de la vidéo et du protocole, toutes les procédures d'animaux ont été effectuées conformément au protocole de l'animal approuvé par l'autorité cantonale de Bâle-Ville, Suisse. Effectuer toutes les procédures dans des conditions stériles là où c'est possible.

1. Préparation de chirurgie

1. Autoclave tous les instruments chirurgicaux et gaze avant de l'utiliser.
2. Chauffer le coussin chaud et organiser instruments chirurgicaux sur la table (Table des Matières / Méthodes).
3. Ouvrez les bandages bande de doigt. Appliquez de la vaseline sur le pavé de la plaie a....

Résultats

Dans une première approche C57BL / 6 ont été transplantés avec IA ^{allogreffes BM12} et IA ^b syngrafts. Après élimination de bandage, greffes signes manifestes de la cicatrisation sans fermeture de la zone de contact en souris C57BL / 6 (Figure 1A). Après élimination de bandage, CD4 ⁺ T inflammation à médiation cellulaire a conduit à l'apparition de zones nécrotiques (taches rouges) et le rejet des IA ^{allogreffes BM12} dans souris C57BL / 6 dans les 13 jours .......

Discussion

la transplantation de la peau est une méthode largement utilisée pour l'étude de rejet et de la tolérance des lymphocytes T dépendant. Comme le modèle de transplantation de la peau a été établi, plusieurs adaptations et modifications ont été appliquées. Dans la procédure décrite, IA ^BM12 transplantation queue peau est réalisée en utilisant des gaz anesthésiques (de isofluorane). L'utilisation de l'anesthésie au gaz diminue le temps d'exécution et la récupération des souris, ce qui diminue le s.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Bétadine solution étalon	Mundipharma
Coton-tige	Carl Roth GmbH	31025060
Dafalgan , UPSA	Bristol Myers Squibb UPSA
Hansaplast Finger strips	Beierdorf AG	REF.76861
Adhésif tissulaire histoacryle	Braun	REF.1050052
Leukotape classic , 2 cm x 10 m	BSN Medical SAS	REF.02204-00
PBS, Saline tamponnée au phosphate, pH 7,4	Invitrogen	10010015	GIBCO
Gaze stérile, 5 x 5 cm, 8 plis	MaiMed GmbH	21010
Pince à motif étroit	FST	11003-12
Ciseaux à iris fins courbé	FST	14095-11
Ciseaux à iris fins	FST	14094-11
Ciseaux Mayo	FST	14010-15
Ciseaux artériels pointe sphérique 11,5 cm	FST	14080-11
Pince à tissus	FST	11021-14
Lame chirurgicale n° 20	Swann-Morton LTD	3006	Acier au carbone
Poignées de lame chirurgicale	Swann-Morton LTD
Seringue, 1 ml	ARTSANA		Jetable
Temgesic, buprénorphine	ESSEX Chemie AG		0,3 mg/ml
Boîtes de culture tissulaire 10 cm, 60,1 cm2	TPP
Vaseline	Vifor SA
Warm pad	Solis		Type 223