Ex Vivo préparatifs de l'ampoule Vomeronasal organes et accessoire olfactive Intact

Résumé

L'ampoule accessoire olfactif de la souris (AOB) a été difficile à étudier dans le contexte du codage sensoriel. Ici, nous démontrons une dissection qui produit in vivo préparation ex dans laquelle les neurones AOB restent fonctionnellement connectées à leurs entrées périphériques, ce qui facilite la recherche en traitement de l'information des phéromones de souris et kairomones.

Résumé

Le système olfactif accessoire de la souris (AOS) est une voie sensorielle spécialisé pour détecter les odeurs non volatiles sociaux, les phéromones, et kairomones. Le premier circuit de neurones dans la voie AOS, appelé le bulbe olfactif accessoire (AOB), joue un rôle important dans l'adoption de comportements sexuels typiques tels que l'agression territoriale et l'accouplement. Ce petit (<1 mm ³⁾ circuit possède la capacité de distinguer des états comportementaux uniques, tels que le sexe, la souche et le stress à partir d'indices chimiosensoriels dans les sécrétions et des excrétions de leurs congénères. Bien que l'organisation de ce système compact offre des possibilités uniques pour l'enregistrement de grandes portions du circuit simultanément, l'enquête du traitement sensoriel dans le AOB reste difficile, principalement en raison de son emplacement expérimentalement désavantageuse dans le cerveau. Ici, nous démontrons une dissection multi-étape qui élimine l'AOB intacte à l'intérieur d'un seul hémisphère du crâne de souris antérieure, laissant connecterions à la fois les voméronasal périphérique neurones sensoriels (VSN) et circuits neuronaux locale intactes. La procédure expose la surface de AOB pour diriger l'inspection visuelle, ce qui facilite les enregistrements électrophysiologiques et optiques à partir des éléments de circuit AOB en l'absence d'anesthésiques. Lors de l'insertion d'une canule fine dans l'organe voméronasal (VNO), qui abrite les VSN, on peut exposer directement la périphérie des odeurs et des phéromones sociaux tout en enregistrant l'activité en aval dans la AOB. Cette procédure permet enquêtes contrôlées dans AOS traitement de l'information, qui peuvent faire la lumière sur les mécanismes reliant l'exposition à la phéromone à des changements de comportement.

Introduction

Traitement sensoriel dans le cerveau des mammifères couvre généralement plusieurs circuits neuronaux réciproquement connectés, chacun extrait les caractéristiques particulières de l'entrée sensorielle. Dans les voies sensorielles, début traitement de l'information est essentielle à la perception et le comportement normal. Dans le système olfactif accessoire (AOS), le bulbe olfactif accessoire (AOB) est le principal circuit neuronal qui relie la périphérie sensorielle aux structures en aval qui dictent l'équilibre hormonal ^{1,2, 3} agression, et l'excitation ^4. En tant que tel, le traitement de l'information au sein de ce circui....

Protocole

Toutes les expériences ont été effectuées conformément aux protocoles approuvés par le sud-ouest institutionnel Comité de protection et d'utilisation des animaux UT, et ont été choisis de manière à minimiser le stress, l'inconfort et la douleur ressentie par les animaux de laboratoire.

1. Chambre Dissection

Une chambre de dissection personnalisé et petit, mince planche de plastique sont nécessaires pour obtenir les meilleurs résultats (figure 1). Construire ou obtenir une telle chambre avant de tenter ce protocole.

2. Solutions de dissection

1. Prépar....

Résultats

Atteindre le succès avec cette préparation prend beaucoup de pratique, et a plusieurs étapes à laquelle il peut échouer. On devrait s'attendre à exiger de nombreuses tentatives avant de parvenir à la réussite. La chambre de dissection personnalisé est nécessaire pour la réussite de ce protocole, et doit être obtenue avant de commencer les étapes ultérieures de la dissection. La conception de la chambre présentée sur la figure 1 est suffisante à cette fin, et peut être réalisé en matière plastique relati.......

Discussion

L'ex préparation VNO-AOB vivo décrite dans ce protocole est une alternative intéressante à anesthésiés in vivo ^5-7 et tranche en direct aiguë ¹⁷ expériences de la fonction AOB. Contrairement aigus expériences AOB de tranche, qui exposent également des éléments de circuit pour des enregistrements électrophysiologiques et optiques, cette préparation conserve tous les afférences sensorielles et les connexions intra-AOB. Bien que cela peut aussi être dit de anesthésié

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Ciseaux droits	Outils scientifiques fins	14002-14
Ciseaux fins-Outils scientifiques	fins	droits 14060-10
Ciseaux fins-Outils scientifiques fins incurvés		14061-10
Pinces Adson	Outils scientifiques fins	11006-12
#3 Poignée de scalpel	Outils scientifiques fins	10003-12
#11 Lames de scalpel	Fisher Scientific	3120030
Lames de rasoir droites en acier au carbone	Fisher Scientific	12-640
Boîte de Pétri 35 mm	Fisher Scientific	08-772-21
Chambre de dissection	Custom  ;	N/A	Voir Figure 1
Planche en plastique Delrin 0,6 cm x 1,5 cm x 0,1 cm Personnalisé	;	N/A
Dow Corning Silicon Graisse	Fisher Scientific	146355D
#5 Pinces,	Student Fine Science Tools	91150-20
#5 Pinces, Biologie Tip	Fine Science Tools	11295-10
#5 Forceps, Student	Fine Science Tools	91150-20
Vannas Spring Scissors	Fine Science Tools	15000-08
1/16 » Mâle Luer	Cole-Parmer	EW-45505-00
1/16 » Tube	Fisher Scientific	14-171-129
Deux tonnes d’époxy	Grainger	5E157
ValveBank Kit de perfusion sous pression	AutoMate Scientific	09-16
Contrôleur numérique/manuel ValveLink	AutoMate Scientific	01-18
NaCl	Sigma-Aldrich	divers
KCl	Sigma-Aldrich	divers
CaCl2 dihydratés	Sigma-Aldrich	divers
MgCl2 hexahydraté	Sigma-Aldrich	divers
NaHCO3	Sigma-Aldrich	divers
NaH2PO4	Sigma-Aldrich	divers<
em>myo-inositol	Sigma-Aldrich	divers
Na-pyruvate	Sigma-Aldrich	divers
Na-ascorbate	Sigma-Aldrich	divers
HEPES buffer	Sigma-Aldrich	divers
Glucose	Sigma-Aldrich	divers

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