Techniques d'imagerie de petits animaux permettent examens diagnostiques de série et les interventions thérapeutiques in vivo. Récemment, le champ des applications a considérablement élargi et comprend actuellement évaluation du développement de la tumeur du côlon, la cicatrisation des plaies et la surveillance de l'inflammation. Ce protocole illustre ces diverses applications potentielles de l'endoscopie murin.
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Article de méthode
Murin endoscopie pour In Vivo Guérison multimodale d'imagerie de la cancérogenèse et de l'évaluation de la plaie intestinale et l'inflammation
* These authors contributed equally
Dans cet article
Résumé
Résumé
Des modèles de souris sont largement utilisés pour étudier la pathogenèse des maladies humaines et d'évaluer les procédures de diagnostic ainsi que des interventions thérapeutiques précliniques. Cependant, l'évaluation convenable d'altérations pathologiques nécessite souvent l'analyse histologique, et lorsqu'elle est effectuée ex vivo, nécessite la mort de l'animal. Par conséquent, dans les paramètres expérimentaux classiques, les examens de suivi intra-individuelles sont rarement possible. Ainsi, le développement de l'endoscopie murin chez la souris en direct permet aux enquêteurs pour la première fois à la fois de visualiser directement la muqueuse gastro-intestinale et aussi répéter la procédure à suivre pour les modifications. De nombreuses applications pour in vivo murin endoscopie existent, y compris l'étude de l'inflammation intestinale ou la cicatrisation des plaies, obtenir des biopsies de la muqueuse à plusieurs reprises, et à administrer localement des agents diagnostiques ou thérapeutiques utilisant des cathéters d'injection miniatures. Plus récemment, l'imagerie moléculaire a étendu l'imagerie diagnostique modalités permettant la détection spécifique de molécules cibles distinctes à l'aide de fractions photosensibles spécifiques. En conclusion, l'endoscopie murin a émergé comme une technologie de pointe roman expérimental pour diagnostic en imagerie in vivo et peut avoir un impact significatif sur la recherche préclinique dans divers domaines.
Introduction
Les modèles animaux ont considérablement enrichi notre compréhension de nombreuses pathologies intestinales. La souris de laboratoire (Mus musculus) est apparue comme un modèle animal de choix dans la recherche biomédicale en raison de son information génétique et génomique abondante et est facilement disponible dans les souches transgéniques et knock-out. En plus d'améliorer la compréhension des maladies pathogenèse, les modèles animaux sont également important utilisés pour tester des médicaments candidats ainsi que des interventions diagnostiques ou thérapeutiques précliniques. Cependant, malgré la diversité des modèles de souris mimant la maladie hum....
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Protocole
Toutes les expériences sur les animaux ont été approuvés par le Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz (LANUV) conformément à la loi allemande de protection des animaux.
1. Matériel et configuration expérimentale
- Les soins aux animaux
- Utilisez des femmes ou des souris mâles de souche tout pesant 20 à 25 g et les héberger conformément à la législation de protection des animaux.
- Nourrir les souris avec chow spécial pour les rongeurs et appliquer nourriture sans luzerne au moins trois jours avant la fluorescence des examens afin de minimiser l'auto-fluorescence endoluminale.
- Fournir auto....
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Résultats
Dans le suivi in vivo de cicatrisation intestinale
Au cours de l'endoscopie de routine, les blessures des muqueuses ont été induites mécaniquement par des pinces miniatures biopsie d'un diamètre de 3 Français (égale à 1 mm; figure 1A). Par la suite, la cicatrisation des plaies a été surveillée par des examens quotidiens endoscopiques et quantifiée par mesure de la surface résiduelle de la plaie en utilisant un logiciel d'édition d'images, par exemple, Ima.......
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Discussion
Épithéliale la cicatrisation est un processus continu. Exfoliation physiologique continue de cellules de surface dans la muqueuse gastro-intestinale se produit nécessitant une régénération fréquente des cellules épithéliales 16. Par conséquent, des problèmes de cicatrisation a un immense impact sur plusieurs maladies, y compris les ulcères gastro-intestinaux et les fuites 17 d'anastomose 18. Evaluation de fond moléculaire ainsi que des médicaments candidats potentiels pour stimuler.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n'ont rien à divulguer.
Remerciements
Nous remercions Sonja Dufentester et Elke Weber pour l'assistance technique d'experts. Nous remercions Faekah Gohar pour la relecture du manuscrit et Stefan Brückner pour le soutien de l'informatique médicale. Ce travail a été soutenu par une subvention interdisciplinaire de la Else-Kröner-Fresenius-Stiftung (2012_A94). D. Bettenworth a été soutenue par une bourse de recherche de la Faculté de médecine, Westfälische Wilhelms-Universität Münster. M. Brückner a été soutenu par une "Gerok" position de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG SFB1009B8) de rotation.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Réactifs | |||
| Régime sans luzerne | Harlan Laboritories, Madison, États-Unis | 2014 | |
| Azoxyméthane (AOM) | Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Allemagne | A5486 | |
| Bepanthen pommade oculaire | Bayer, Leverkusen, Allemagne | 80469764 | |
| Sulfate de dextran sodique (DSS) | TdB Consulatancy, Uppsala, Suède | DB001 | |
| Eosin | Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Allemagne | E 4382 | |
| Acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) | Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Allemagne | E 9884 | |
| Falcon Tube 50 ml | BD Biosciences, Erembodegem, Belgique | 352070 | |
| Florene 100 V/V | Abbott, Wiesbaden, Allemagne | B506 | |
| Haematoxylin | Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Allemagne | HHS32-1L | |
| Isopentane (2-méthylbutane) | Sigma-Aldrich, Deisenhofen, Allemagne | M32631-1L | |
| Bleu de méthylène | Merck, Darmstadt, Allemagne | 1159430025 | |
| O.C.T. Tissue Tek compound ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; | Sakura, Zoeterwonde, Pays-Bas | 4583 | |
| Omnican F - canula | Braun, Melsungen, Allemagne | 9161502 | |
| Saline tamponnée au phosphate, PBS | Lonza, Verviers, Belgique | 4629 | |
| Chlorure de sodium 0,9 % | Braun, Melsungen, Allemagne | 5/12211095/0411 | |
| Régime standard | Altromin, Lage, Allemagne | 1320 | |
| Tissue-Tek Cryomold | Sakura, Leiden, Pays-Bas | 4566 | |
| Vitro &ndash ; Clud ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; | R. Langenbrinck, Teningen, Allemagne | 04-0002 ; | |
| Equipment | |||
| AIDA Control | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Germany | 20 096020 | |
| Filtre passe-bande | Semrock, Rochester, USA | HC 716/40 | |
| Filtre passe-bande | Semrock, Rochester, USA | HC 809/81 | |
| Pince à biopsie, 3 Fr., 28 cm | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 61071ZJ | |
| Dell | Monitor Dell, Francfort-sur-le-Main, Allemagne | U2412Mb | |
| Gaine d’examen, 9 Fr.Karl | Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 61029D | |
| Gaine d’examen, 9 Fr.Karl | Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 61029C | |
| Câble d’éclairage à fibre optique, 3,5 mm | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 69495NL | |
| Bleu fluorescéine Système de filtration | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 20100032 | |
| Filtre barrière à la fluorescéine | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 20100033 | |
| Pédale de commande | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 20010430 | |
| Télescope HOPKINS, 1,9 mm, Longueur 10 cm | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 1830231 | |
| SCB D-light P ; | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 20 133720 | |
| SCB tricam SL II | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 20 2230 20 | |
| Instruments de tubulure VETPUMP II | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 69811 | |
| Tricam PDD PAL | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 20221037 | |
| UniVet Porta | Groppler Medizintechnik, Deggendorf, Allemagne | BKGM 0451 | |
| Vetpump 2 | Karl Storz - Endoskope, Tuttlingen, Allemagne | 69321620 |
Références
- Bettenworth, D., et al. Translational 18F-FDG PET/CT imaging to monitor lesion activity in intestinal inflammation. Journal of nuclear medicine : official publication, Society of Nuclear Medicine. 54, 748-755 (2013).
- Lewis, J. S., Achilefu, S., Garbow, J. R., Laforest, R., Welch, M. J.
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Réimpressions et autorisations
