En temps réel cytotoxicité dans le sang total humain

Résumé

L'ensemble du test de cytotoxicité de sang (WCA) est un test de cytotoxicité au point en incorporant la technologie de positionnement cellulaire à haut débit à la microscopie par fluorescence et un traitement d'image automatique. Ici, nous décrivons comment les cellules de lymphomes traitées avec un anticorps anti-CD20 peuvent être analysés en temps réel dans le sang total humain pour fournir une analyse quantitative de la cytotoxicité cellulaire.

Résumé

Un essai de cytotoxicité sang total à base de cellules vivantes (WCA) qui permet l'accès à l'information temporelle de la cytotoxicité cellulaire global est développé avec une technologie de positionnement cellulaire à haut débit. Les populations de cellules tumorales cibles sont d'abord pré-programmés de l'immobilisation dans un format de réseau, et marquées avec des colorants fluorescents verts cytosoliques. Après la formation de la matrice de cellules, des médicaments anticorps sont ajoutés en combinaison avec du sang total humain. L'iodure de propidium (PI) est ensuite ajouté à évaluer la mort cellulaire. Le réseau de cellules est analysée avec un système d'imagerie automatique. Bien que les étiquettes de colorant cytosolique populations de cellules tumorales ciblées, PI étiquettes des populations de cellules tumorales mortes. Ainsi, le pourcentage de cancer de la destruction des cellules cibles peut être quantifiée par le calcul du nombre de cellules survivantes ciblées pour le nombre de cellules cibles mortes. Avec cette méthode, les chercheurs peuvent accéder en fonction du temps et de l'information de la cytotoxicité cellulaire dépendant de la dose. Remarquablement, pas de radio dangereuxproduits chimiques sont utilisés. Le WCA présenté ici a été testée avec le lymphome, la leucémie, et les lignées cellulaires de tumeurs solides. Par conséquent, l'AOC permet aux chercheurs d'évaluer l'efficacité des médicaments dans un état ​​très pertinente ex vivo.

Introduction

Les progrès récents dans l'industrie pharmaceutique ont conduit à un intérêt accru dans la réalisation des identifications spécifiques des anticorps contre les cellules de la tumeur et des traitements personnalisés du cancer; Toutefois, plusieurs obstacles sont rencontrés dans le processus. Seulement 5% des agents qui ont une activité anticancéreuse en développement préclinique sont autorisés après avoir montré une efficacité suffisante dans la phase des essais II-III ^1,2. Les stratégies précliniques (à la fois in vitro et in vivo) sont sous-optimaux comme de nombreux exemples ont montré que les médicaments anti-tumoraux chez les huma....

Protocole

1. Préparation cellulaire cible

1. Maintenir (cellules par exemple. Raji du lymphome) Les cellules cibles dans des milieux de croissance (milieu RPMI 1640 de la culture, avec 10% de sérum inactivé par la chaleur bovin fœtal (FBS), 4 nM de L-glutamine et 500 UI / ml de pénicilline / streptomycine) à 37 ^° C dans un incubateur à _CO2 à 5%.
2. Centrifuger l'échantillon pour former un culot des cellules cibles dans un tube de 15 ml. durée de centrifugation varie en fonction de différents types de cellules; centrifuger pendant 3 min à 468 g pendant cellules Raji.
3. Première aspirer les bulles formées sur la surface d....

Résultats

Des anticorps anti-CD20 et des cellules de lymphome (cellules Raji et MC / CAR) a été choisi comme système modèle pour montrer l'ensemble de dosage de cytotoxicité de sang (WCA) ^7,8. Cellules Raji eu grand nombre de copies de CD20 sur la surface des cellules, tandis que les cellules MC / CAR avaient un faible nombre de copies de CD20 sur leur membrane. Cellules ciblées ont d'abord été colorées en vert avec des colorants verts fluorescence cytosoliques et disposés sur la plaque de 96 puits. 10.000 - 50.000 cel.......

Discussion

AOC est une critique en outil de dépistage anti-cancer in vitro avec une résolution cellulaire unique ^12-16, idéalement utilisé après des projections de cibles traditionnels tels que CDC et analyses ADCC ^9-11, et avant que les tests précliniques animales. Actuellement, les tests de dépistage de cibles primaires tels que CDC ou ADCC essais sont effectués par un support simplifiés ou un système tampon. Toutefois, les candidats médicaments qui montrent une efficacité dans ces système.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Fixation de cellule 96 kits de plaques de puits  ;	Adheren	AP9601
Suspension Réseau de cellules uniques Lame de chambre à 8 puits	Adheren	SS0801
Adhérent Réseau de cellules uniques Lame de chambre à 8 puits	Adheren	SS0802
Lignée cellulaire de lymphome CD20+	ATCC	CCL-86	Cellules Raji
Lignée cellulaire de lymphome CD20-ATCC		CRL-8083	MC/CAR
RPMI 1640 avec L-glutamine	Life Technologies	11875-119
Sérum fœtal bovin	Thermo	SH30070.01HI
Peni/Strep	Life Technologies	15070063
Colorant cytosolique	Life Technologies	C7025	Cell Tracker Green
Rituxan (Biosimilaire)  ;	Eureka Therapeutics
Sang total humain	Allcells	WB001
Iodure de propidium	Sigma	P4170-10MG
Système d’imagerie automatique	Dispositifs moléculaires	Contact Fournisseur Cell	Reporter
Programme de comptage cellulaire	Dispositifs moléculaires Contacter	Fournisseur	Cell Reporter