Préparation de Mica charge bicouches lipidiques pour haute résolution microscopie optique d&#39;imagerie

Artur Matysik; Rachel S. Kraut

doi:10.3791/52054

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Article de méthode

Préparation de Mica charge bicouches lipidiques pour haute résolution microscopie optique d'imagerie

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DOI :

10.3791/52054

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7 juin 2014

Artur Matysik¹ , Rachel S. Kraut¹

¹School of Biological Sciences, Nanyang Technological University

Dans cet article

Résumé

Nous présentons une méthode de préparation de mica soutenu bicouches lipidiques pour microscopie à haute résolution. Mica est transparent et plat à l'échelle atomique, mais rarement utilisé dans l'imagerie en raison des difficultés de manipulation; notre préparation résulte en un dépôt régulier de la feuille de mica, et de réduire la matière utilisée dans la préparation de bicouche.

Résumé

Bicouches lipidiques supportées (BLP) sont largement utilisés comme un modèle pour l'étude des propriétés de la membrane (de séparation de phase, regroupement, dynamique) et son interaction avec d'autres composés, tels que des médicaments ou des peptides. Cependant caractéristiques SLB diffèrent selon le support utilisé.

Techniques couramment utilisées pour l'imagerie SLB seul et les mesures sont la microscopie de fluorescence de la molécule, FCS et microscopie à force atomique (AFM). Parce que la plupart des études d'imagerie optique sont réalisées sur un support en verre, tandis que l'AFM nécessite une surface extrêmement plate (généralement de mica), les résultats de ces techniques ne peuvent pas être comparés directement, étant donné que les propriétés de charge et la douceur de ces matériaux influencent fortement la diffusion. Malheureusement, le niveau élevé de la dextérité manuelle nécessaire pour le découpage et le collage de fines tranches de mica à la lame de verre présente un obstacle à l'utilisation systématique de mica pour la préparation SLB. Bien que ce serait la méthode de choix, par exemple le mica préparésurfaces finissent souvent par être inégale (ondulé) et difficile à l'image, en particulier avec la petite distance de travail, des lentilles de grande ouverture numérique. Nous présentons ici une méthode simple et reproductible pour la préparation minces, les surfaces de mica plats pour le dépôt de la vésicule lipidique et la préparation SLB. De plus, notre chambre sur mesure ne nécessite que de très petits volumes de vésicules de formation SLB. Les résultats de la procédure globale de la production efficace, simple et peu coûteux de surfaces de bicouche lipidique de haute qualité qui sont directement comparables à celles utilisées dans les études de l'AFM.

Introduction

L'objectif global du présent Protocole est de montrer une méthode pour la préparation des surfaces de mica pour l'imagerie haute résolution de mica soutenu bicouches lipidiques (BLP) à l'aide de la microscopie optique de fluorescence totale de réflexion interne (TIRFM) ou la microscopie confocale, qui pourrait également être combiné avec force atomique microscopie (AFM).

BLP sont un modèle largement utilisé pour de nombreuses études de groupement lipidique, séparation des phases, la dynamique des composants de bicouche ou de leurs interactions avec des peptides, des protéines ou d'autres composés ^5.1. Différents....