Article de méthode

Technique mini-invasive pour injection dans Rat Optic Nerve

DOI :

10.3791/52249

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19 mai 2015

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1Department of Neurology, Johns Hopkins University

Dans cet article

Résumé

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L’injection directe dans le nerf optique du rat est utile pour la recherche régénérative. Nous démontrons une technique mini-invasive d’injection directe dans un nerf optique de rat qui n’implique pas d’ouverture du crâne. Grâce à cette méthode, les complications chirurgicales sont minimisées et la récupération est plus rapide.

Résumé

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Le nerf optique du rat est un modèle utile pour la recherche sur la régénération des cellules souches. L’injection directe dans le nerf optique du rat permet l’administration dans le système nerveux central lors d’une chirurgie mini-invasive sans ablation osseuse. Cette technique décrit une approche de visualisation et d’injection directe du nerf optique après une dissection fasciale mineure de la crête orbitaire, à l’aide d’une suture de traction conjonctivale pour tirer doucement l’œil vers le bas et vers l’extérieur. Des exemples représentatifs d’un nerf optique injecté montrent une injection réussie de billes teintées.

Introduction

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Le nerf optique offre un emplacement idéal pour le système nerveux central (SNC), y compris la recherche régénérative conditions ophtalmologiques tels que la névrite optique, le glaucome et les traumatismes. Les injections de diverses cellules souches ont démontré une efficacité ou soit montré prometteur pour remplacer la perte de myéline, ce qui augmente le nombre axonale et / ou prévenir les maladies dégénératives. 1,2

Le nerf optique humain contient environ 1,2 million d'axones parallèles voyageant de la rétine au chiasme avec un diamètre d'environ 3,0-3,5 mm. 3 Pour modéliser les maladies humaines en labo....

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Protocole

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NOTE: Toutes les procédures d'animaux ont été approuvés par le Comité des soins et de l'utilisation des animaux Johns Hopkins. machines d'anesthésie nécessitent une inspection annuelle et l'étalonnage nécessaire.

1. Anesthésie et de positionnement

  1. Anesthésie.
    1. Effectuer toutes les interventions chirurgicales sous anesthésie avec 2-3% isofluorane. Confirmez niveau approprié de l'anesthésie par pincement de l'orteil et le taux de respiration. Vérifiez que le rat ne bronche pas en réponse à un pincement de l'orteil.
      NOTE: Un tressaillement indique anesthésie qui est trop tard et peut nécessiter une anesthésie....

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Résultats

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A la fin de l'expérience, les rats ont été sacrifiés et perfusés avec 4% de paraformaldehyde. Les nerfs optiques ont été soigneusement disséqués et montés pour cryostat sectionnement. La figure 2 montre un exemple d'un rat ensemble nerf optique à faible puissance dans lequel colorant bleu Evans a été injecté afin de visualiser le site. La flèche indique l'emplacement précis de l'injection. Cette dissection a été fait en quelques minutes de l'injection, comme indiqué par la diffusion limitée du colorant .......

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Discussion

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L’injection directe dans le nerf optique de cellules souches ou d’autres produits destinés à faciliter la régénération constitue un modèle pratique par rapport à d’autres moyens d’injection dans le SNC. Cette technique prend moins de temps, nécessite moins d’anesthésie totale, évite le forage ou l’ablation du crâne ou du tissu osseux, réduit les taux de complications et permet une récupération plus rapide après la chirurgie.

Les étapes les plus critiques de ce protocole comprennent : 1. Une h.......

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Déclarations de divulgation

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Les auteurs n’ont aucune divulgation significative à signaler.

Remerciements

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Cette étude a été soutenue par NeuralStem, Inc., et Johns Hopkins Project RESTORE.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Rat LewisCharles River4N’importe quelle souche de rat fonctionnera.
Appareil d’anesthésieSurgivetCDS9000CDS 9000 Appareil d’anesthésie pour petits animaux - Pompe
perfusionStoelting53129
Microscope de dissectionNational Optical409-411-1105
Source lumineuse à fibre optiqueFisher Scientific12-562-21
Dissection et instrument stéréotaxiqueStoelting51400
Extracteur de pipettesKopf750
PipettesWorld Precision Instruments18150-6
Lames de scalpel jetablesHarvard Apparatus810-15-021
Ciseaux d’iridectomieMicroscopie électronique SciencesUniband LA-4XF
à

Références

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  1. Dahlmann-Noor, A., Vijay, S., Jayaram, H., Limb, A., Khaw, P. T. Current approaches and future prospects for stem cell rescue and regeneration of the retina and optic nerve. Canadian journal of ophthalmology Journal canadien d'ophtalmologie. 45 (4), 333-341 (2010).
  2. Quigley, H. A., Iglesia, D. S.

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Mots-clés

Injection dans le nerf optiqueChirurgie mini invasiveSuture de traction conjonctivaleInjection par micropipette en verreAdministration de cellules souchesColorant bleu d EvansDissection de la cr te orbitaleRetrait de la graisse r tro orbitaleVisualisation par microscopie

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