Évaluation de poisson zèbre fonction rénale utilisant une habilitation immunofluorescence

Summary

Le poisson zèbre est un outil populaire pour modéliser la maladie rénale chronique (CKD). Cependant, leur petite taille, il est impossible d'évaluer la fonction rénale en utilisant des méthodes traditionnelles. Nous décrivons une fluorescente reins de colorant jeu dosage qui permet ^une analyse quantitative de la fonction rénale dans le poisson zèbre CKD.

Abstract

L'embryon de poisson zèbre offre un modèle souple pour étudier l'organogenèse et modéliser les maladies génétiques humaines. Malgré sa simplicité relative, le rein et le poisson zèbre développe fonctions dans presque la même manière que les humains. Une différence importante dans la construction du rein humain est la présence de millions de néphrons par rapport au poisson-zèbre ne possède que deux. Cependant, la simplification d'un système aussi complexe en unités fonctionnelles de base a aidé notre compréhension de la façon dont le rein développe et exploite. Chez le poisson zèbre, la ligne médiane située glomérule est responsable de la filtration du sang initial en deux tubules pronephrique qui divergent afin de fonctionner bilatéralement long de l'axe embryonnaire avant de fusionner les uns aux autres au cloaque. Les tubules pronephrique sont fortement peuplées par des cils mobiles qui facilitent le mouvement de filtrat le long du tubule segmenté, permettant l'échange de différents solutés avant de finalement sortir via le cloaque ^2-4. De nombreux gènes responsables de la maladie rénale chronique, incLUDING ceux liés à ciliogenèse, ont été étudiés chez le poisson zèbre ^5. Cependant, une attraction majeure de retour a été la difficulté d'évaluer la fonction rénale poisson zèbre après manipulation génétique. Essais traditionnels pour mesurer le dysfonctionnement du rein chez l'homme ont prouvé non translationnelle poisson zèbre, principalement en raison de leur environnement aquatique et de petite taille. Par exemple, il ne est pas physiquement possible d'extraire le sang de l'embryon organisé poissons pour l'analyse de l'urée et de la créatinine contenu, car ils sont trop petits. En outre, le poisson zèbre ne produisent pas suffisamment d'urine pour tester sur une simple protéinurie 'jauge', qui est souvent effectuée lors des examens initiaux des patients. Nous décrivons un dosage par fluorescence qui utilise la transparence optique du poisson zèbre pour contrôler quantitativement le dégagement d'un colorant fluorescent, au fil du temps, du système vasculaire et en sortie par le rein, pour donner une lecture de la fonction rénale ^1,6-9.

Introduction

Le rein humain joue un rôle crucial dans le filtrage des déchets métaboliques du sang et la récupération de solutés nécessaires pour maintenir l'homéostasie cellulaire. Il existe un certain nombre de maladies génétiques humaines qui provoquent un dysfonctionnement rénal. La maladie rénale héréditaire la plus fréquente est autosomique polykystose rénale dominante (PKD) caractérisé par le développement des sacs remplis de fluide dans les tubules néphrétiques; les dommages causés par la cystogénèse est préjudiciable à la fonction rénale ^10. ADPKD a une occurrence de 1: 800-1: 1000 et représente 8 à 10% des patients en insuffisance rénale au stade terminal....

Protocol

Déclaration éthique: animaux, l'élevage, l'entretien et les procédures sont définies et contrôlées par la Loi 1986. Tous expérimentation animale a été réalisée sous licences accordées par le ministre de l'Intérieur (PIL n ° 70/7892) en conformité avec biologique Animaux (Scientific Procedures) Services de Groupe de gestion et le comité d'éthique services biologique, SGUL, Londres, Royaume-Uni. Tous les efforts ont été faits pour réduire le nombre d'animaux utilisés et d'affiner les procédures et l'élevage afin de minimiser la souffrance et améliorer le bien-être.

1. Préparation des instruments, anesthésique et Fl....

Results

Syndrome de Bardet-Biedl (BBS) est une ciliopathie hétérogène rare qui affecte environ 1: 160 000 personnes dans le monde ^16. Les patients présentent un certain nombre de problèmes liés notamment reins polykystiques, suite patients ont souvent besoin de dialyse rénale ou une transplantation ^24. ESRF est la cause la plus fréquente de décès chez BBS, avec environ 30% des patients CKD en développement ^16. Actuellement, 20 gènes non liés ont été impliqués dans BBS sans association génotype-p.......

Discussion

Poisson zèbre offre un outil précieux pour modéliser les maladies génétiques humaines, leur utilisation comme un instrument scientifique pour la recherche in vivo ont permis des études détaillées de la répartition génétique de nombreux systèmes biologiques, y compris le rein. Une grande partie est maintenant compris comment le rein poisson zèbre se développe et fonctionne. Les similitudes frappantes avec néphrogenèse humaine et d'homologie avec la maladie causant des gènes ²¹ a montré comment le .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
P-97 SUTTER Extracteur de micropipette de type Flaming/Brown	Intracel	P-97
Capillaires à paroi standard en borosilicate Appareil	de Harvard	30-0017
Lames de microscope en verre	VWR International	631-0109
Colle à résine époxy	Evo-Stik
Rhodamine B 10 000 MW étiqueté Dextran	Life technologies	D-1824
N-Phénylthiourée  ;	Sigma-Aldrich  ;	P7629
Bleu de méthylène  ;	Sigma-Aldrich	M9140
Sel de méthanesulfonate d’éthyle 3-aminobenzoate	Sigma-Aldrich	A5040
méthylcellulose	Compresseur d’air Sigma-Aldrich	M0512
;	Jun-Air	OF302-15
Picospritzer III  ;	Parker Instruments  ;	051-0500-900
Micromanipulateur compact à 3 axes  ;	Marzhauser	MM33  ;
Microscope stéréo de dissection	Nikon	SMZ1000
pointes de microchargeur	Eppendorf	5242956003
Dumont #5 forceps  ;	Sigma-Aldrich	F6521
	Pyser- SGI	02A00404