Mise en place d&#39;un modèle de xénogreffe humain de myélome multiple dans le poulet pour étudier la croissance tumorale, l&#39;invasion et l&#39;angiogenèse

Agnieszka Martowicz; Johann Kern; Eberhard Gunsilius; Gerold Untergasser

doi:10.3791/52665

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Article de méthode

Mise en place d'un modèle de xénogreffe humain de myélome multiple dans le poulet pour étudier la croissance tumorale, l'invasion et l'angiogenèse

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DOI :

10.3791/52665

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1 mai 2015

Agnieszka Martowicz^*¹^,⁴ , Johann Kern^*¹^,² , Eberhard Gunsilius¹ , Gerold Untergasser¹^,³

¹Department of Internal Medicine V, Innsbruck Medical University, ²Oncotyrol GmbH, ³Tyrolean Cancer Research Institute, ⁴Division of Vascular Biology, Department of Medical Biochemistry and Biophysics, Karolinska Institute

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Les cellules humaines myélome multiple (MM) nécessitent le micro-environnement favorable des cellules mésenchymateuses et des composants de la matrice extracellulaire pour la survie et la prolifération. Nous avons établi un modèle in vivo d'embryons de poulet avec des cellules de myélome et mésenchymateuses humaines greffées à étudier les effets des médicaments contre le cancer sur la croissance tumorale, l'invasion et l'angiogenèse.

Résumé

Le myélome multiple (MM), une maladie des cellules plasmatiques malignes, reste incurable et de nouveaux médicaments sont nécessaires pour améliorer le pronostic des patients. En raison de l'absence du microenvironnement osseux et des facteurs de croissance auto / paracrine des cellules MM humaines sont difficiles à cultiver. Par conséquent, il ya un besoin urgent d'établir une bonne in vitro et dans les systèmes de culture in vivo pour étudier l'action de nouveaux produits thérapeutiques sur les cellules de MM humaines. Ici, nous présentons un modèle à cultiver des cellules du myélome multiple humain dans un environnement 3D complexe in vitro et in vivo. Des lignées cellulaires MM OPM-2 et le milieu RPMI-8226 ont été transfectées pour exprimer le transgène GFP et ont été cultivées en présence de cellules mésenchymateuses humaines et de collagène de type I Matrice sphéroïdes tridimensionnels. En outre, les sphéroïdes ont été greffés sur la membrane chorio-allantoïde (CAM) d'embryons de poulet et la croissance tumorale a été contrôlée par microscopie à fluorescence stéréo. Les deux modèles permettent l'étude de roman dru thérapeutiquegs dans un environnement 3D complexe et la quantification de la masse des cellules tumorales après des greffes homogénéisation dans un transgène GFP spécifique au test ELISA. En outre, les réponses angiogéniques de l'hôte et l'invasion des cellules tumorales dans le tissu de l'hôte sous-jacent peuvent être surveillées quotidiennement par un microscope stéréoscopique et analysés par coloration immunohistochimique à l'encontre des cellules humaines tumorales (Ki-67, CD138, Vimentin) ou des cellules murales hôtes couvrant vaisseaux sanguins (desmine / ASMA).

En conclusion, le système onplant permet d'étudier la croissance des cellules MM et l'angiogenèse dans un environnement 3D complexe et permet le criblage de composés thérapeutiques ciblant la survie et la prolifération des cellules MM.

Introduction

Le myélome multiple (MM) est caractérisé par une prolifération de plasmocytes malins dans la moelle osseuse, des lésions osseuses et une immunodéficience ¹. Bien que de nouvelles options de traitement telles que les inhibiteurs du protéasome (bortézomib) et les médicaments immunomodulateurs (pomalidomide et lénalidomide) soient disponibles, le MM reste une tumeur maligne incurable avec un pronostic sombre ². Le mauvais pronostic pourrait s’expliquer par l’extraordinaire hétérogénéité des clones de cellules MM qui contribue à des réponses variables au traitement, en particulier sous traitement de longue durée et sous pression de sélection des ....