Xenopus laevis comme un modèle pour identifier traduction Dépréciation

Amélie de Broucker; Pierre Semaille; Katia Cailliau; Alain Martoriati; Thomas Comptdaer; Jean-François Bodart; Alain Destée; Marie-Christine Chartier-Harlin

doi:10.3791/52724

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Article de méthode

Xenopus laevis comme un modèle pour identifier traduction Dépréciation

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DOI :

10.3791/52724

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27 septembre 2015

Amélie de Broucker¹ , Pierre Semaille¹ , Katia Cailliau² , Alain Martoriati² , Thomas Comptdaer¹ , Jean-François Bodart² , Alain Destée¹ , Marie-Christine Chartier-Harlin¹

¹Team "Early Stages of Parkinson's Disease" of the Jean-Pierre Aubert Research Center, INSERM UMR-S1172, CHRU Lille, University of Lille 1 and Lille 2, ²Team "Signal Division Regulation", CNRS UMR 8576, University of Lille 1

Dans cet article

Résumé

Le contrôle de la synthèse des protéines se produit principalement à l’étape d’initiation de la traduction, dont les déficiences sont liées à divers troubles. Pour mieux comprendre leur étiologie, nous avons décrit ici un protocole utilisant des ovocytes de Xenopus laevis évaluant la traduction du transcrit mos en présence d’un mutant du facteur d’initiation de traduction eIF4G1.

Résumé

La synthèse des protéines est un processus fondamental de l'expression du gène impact divers processus biologiques, notamment d'adaptation à des conditions environnementales. L'étape d'initiation, qui implique l'ensemble des sous-unités ribosomiques à l'ARNm codon d'initiation, facteur d'initiation impliqués y compris eIF4G1. Les défauts de ce taux étape limitante de la traduction sont liées à divers troubles. Pour étudier les conséquences potentielles de ces dérégulations, Xenopus laevis ovocytes constituent un modèle attractif avec des degrés élevés de conservation des mécanismes cellulaires et moléculaires essentiels avec l'homme. En outre, au cours de la maturation de la méiose, les ovocytes sont transcriptionnellement réprimés et toutes les protéines nécessaires sont traduits à partir préexistantes, ARNm maternels. Ce modèle peu coûteux permet ARNm exogène pour devenir parfaitement intégrés avec une traduction efficace. Ici, on décrit un protocole pour l'évaluation de la traduction avec un facteur d'intérêt (ici eIF4G1) en utilisant stored ARNm maternel qui sont les premiers à être polyadénylé et traduits au cours de la maturation ovocytaire comme une lecture physiologique. Dans un premier temps, l'ARNm synthétisé par transcription in vitro de plasmides d'intérêt (ici eIF4G1) sont injectés dans des ovocytes et la cinétique de maturation de l'ovocyte par la détection de panne Germinal vésicule est déterminé. La cible de l'ARNm maternelle étudié est la sérine / thréonine mos-protéine-kinase. Son polyadénylation et sa traduction subséquente sont étudiées conjointement avec l'expression et la phosphorylation de protéines des mos cascade impliqué dans la maturation des ovocytes de signalisation. Variations de l'actuel protocole à mettre en avant les défauts de traduction sont également proposées pour souligner son applicabilité générale. À la lumière de la preuve que la synthèse protéique aberrante peut être impliquée dans la pathogenèse de troubles neurologiques émergents, un tel modèle offre la possibilité d'évaluer facilement l'dépréciation et d'identifier de nouvelles cibles.

Introduction

Les protéines sont des éléments essentiels de la vie cellulaire et donc à plus grande échelle de l'organisme. Ils assurent la majorité des fonctions cellulaires, y compris la structure, le transport, la réaction de catalyse, la réglementation, l'expression des gènes, etc. Leur expression est le résultat d'un mécanisme complexe de traduction permettant la conversion d'un ARNm en protéine. La traduction est soumise à divers contrôles d'adapter et de réguler l'expression des gènes en fonction des besoins de la cellule, au cours de la différenciation et le développement, le vieillissement, les stress physiologiques ou manifestations pathologiques.....