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Résumé

Nous décrivons ici une méthode pour infliger tête fermée cérébrale traumatique blessures (TBI) chez la drosophile. Cette méthode fournit une passerelle pour enquêter sur les mécanismes cellulaires et moléculaires qui sous-tendent pathologies TBI en utilisant la vaste gamme d'outils expérimentaux et techniques disponibles pour les mouches.

Résumé

Lésion cérébrale traumatique (TBI) affecte des millions de personnes chaque année, provoquant une insuffisance de physique, cognitif, et les fonctions comportementales et de la mort. Les études utilisant la drosophile ont contribué percées importantes dans la compréhension des processus neurologiques. Ainsi, dans le but de comprendre la base moléculaire et cellulaire de pathologies TBI chez les humains, nous avons développé le dispositif High Impact Trauma (HIT) à infliger tête fermée TBI dans les mouches. Les mouches soumises à l'affichage des phénotypes de périphériques compatibles avec HIT TBI humaine tels que l'incapacité temporaire et une neurodégénérescence progressive. Le dispositif de HIT utilise un mécanisme basé sur ressort pour propulser mouches contre le mur d'un flacon, causant des dommages mécaniques au cerveau de la mouche. Le dispositif est peu coûteux et facile à construire, son fonctionnement est simple et rapide, et il produit des résultats reproductibles. Par conséquent, le dispositif de HIT peut être combiné avec des outils et des techniques de vol pour répondre fondamentale expérimentales existantesquestions sur TBI qui peuvent conduire au développement de diagnostics et traitements de TBI. En particulier, le dispositif de HIT peut être utilisé pour effectuer des criblages génétiques à grande échelle pour comprendre la base génétique des pathologies TBI.

Introduction

Une lésion cérébrale traumatique (TBI) est défini comme étant une lésion au cerveau à partir d'une force mécanique externe. La plupart du temps, les résultats de TBI forces crâniens fermés tels que les forces d'inertie et de l'accélération franches et des forces de décélération qui provoquent le cerveau de frapper l'intérieur du crâne. Aux États-Unis, on estime que 50 000 personnes meurent chaque année de TBI et de 2,5 à 6.500.000 personnes vivent avec les conséquences de TBI, y compris débilitante physique, cognitif, des problèmes de comportement et ^1,2. Les conséquences de TBI sont pas seulement due à des lésions mécaniques primaires dans....

Protocole

1. La construction de l'appareil de HIT

1. Accrocher le ressort au conseil à l'aide de deux pinces et quatre vis (figure 1A). Centrer les pinces par rapport à la largeur de la planche et Butt-les un contre l'autre avec la chasse d'eau de serrage externe avec le bord de la carte. Avant de fixer les pinces, les plier en utilisant une pince pour tenir étroitement au cours du printemps.
   NOTE: Voir le tableau 1 pour les descriptions des matériaux nécessaires pour la construction du dispositif de HIT. La fin serrée du ressort devrait être de 1/8 de pouce (3,2 mm) à partir du bord de la carte, et l'extrémi....

Résultats

Nous sommes intéressés à comprendre pourquoi les mouches meurent peu après la lésion primaire. Pour quantifier la mort, nous avons déterminé l'indice de mortalité à 24 h (MI _24), qui est le pourcentage de mouches qui sont morts dans les 24 heures de la blessure primaire. Les mouches soumises à des grèves du dispositif de HIT ont été incubées à 25 ° C dans un flacon avec de la nourriture à la mouche, et le nombre de mouches mortes a été compté après 24 h. Nous avons utilisé cette approche pour identifier l.......

Discussion

La méthode de dispositif de HIT se distingue des autres méthodes qui leur causent des lésions traumatiques chez les mouches par le fait qu'il provoque la tête privée plutôt que de pénétrer TBI ^11. En outre, la méthode de dispositif de HIT prend moins de temps, d'efforts et d'habileté pour infliger des TBI dans beaucoup de mouches, de sorte que la méthode est plus favorable que d'autres méthodes à écrans génétiques à grande échelle. Enfin, le fait que les blessures infligées primaires par le di.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Ressort de compression zingué	The Hillman  ; Groupe	540189	9 7/8 pouces (longueur, 2,2 cm), 15/16 pouces (diamètre extérieur, 2,4 cm), 0,12 pouce (taille du fil, 0,3 cm)
Planche			9 pouces (longueur, 22,9 cm), 6,5 pouces (largeur, 16,5 cm), 0,75 pouce (hauteur, 1,9 cm)
Pinces	Sigma Electrical Manufacturing Corporation	49822	3,10 pouces (longueur, 7,9 cm), 0,68 pouce (largeur, 1,7 cm), 1,11 pouce (hauteur, 2,8 cm), sangles EMT à deux trous, cliquez sur le type pour 1 pouce (2,5 cm) conduit EMT
en acier Boucle demi-velcro			3 pouces (longueur, 7,6 cm), (3/4 pouce de largeur, 1,9 cm)
Couvercle de seau à glace en polyuréthane	Fisher Scientific	02-591-45	9 1/8 pouces (longueur, 23,2 cm), 9 1/8 pouces (largeur, 23,2 cm), 1 1/4 pouce (hauteur, 3,2 cm)
Flacons anti-mouches en plastique	Applied Scientific	AS-510	3 11/16 pouces (hauteur, 9,4 cm), 1 1/16 pouce (diamètre intérieur, 2,7 cm), 1 1/8 pouce (diamètre extérieur, 2,9 cm)
Grandes boules de coton	Fisher Scientific	22-456-883
Rapporteur			10 pouces (diamètre, 25,4 cm)

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