Cellules T Capturez bactéries par Transinfection de cellules dendritiques

Aranzazu Cruz-Adalia; Guillermo Ramírez-Santiago; Mónica Torres-Torresano; Raquel Garcia-Ferreras; Esteban Veiga Chacón

doi:10.3791/52976

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Article de méthode

Cellules T Capturez bactéries par Transinfection de cellules dendritiques

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DOI :

10.3791/52976

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13 janvier 2016

Aranzazu Cruz-Adalia¹ , Guillermo Ramírez-Santiago¹^,² , Mónica Torres-Torresano¹^,² , Raquel Garcia-Ferreras¹^,² , Esteban Veiga Chacón¹

¹Cellular and Molecular Biology, Spanish National Research Council (CSIC), Spanish National Biotechnology Centre (CNB-CSIC), ²Hospital de Santa Cristina, Healthcare Research Institute Princesa Hospital (IIS-Princesa)

Dans cet article

Résumé

Voici un protocole est présenté pour mesurer la capture bactérienne par les cellules ^T CD4 + qui se produit lors de la présentation de l'antigène par les cellules dendritiques transinfection de pré-infectées (DC). Nous montrons comment effectuer les mesures nécessaires: l'isolement de cellules primaires, infection de DC, DC / T la formation de conjugués de la cellule, et la mesure des bactérienne transfection de cellules T.

Résumé

Récemment, nous avons montré, contrairement à ce qui est décrit, que les lymphocytes T CD4⁺, paradigme des cellules immunitaires adaptatives, capturent les bactéries des cellules dendritiques (DC) infectées par un processus appelé transinfection. Nous décrivons ici l’analyse du processus de transinfection, qui se produit au cours de la présentation de l’antigène. Ce processus a été dévoilé en utilisant des lymphocytes T CD4⁺ de souris transgéniques OTII, qui portent un récepteur de lymphocytes T (TCR) spécifique d’un peptide d’ovoalbumine (OVAp), qui peut donc former des complexes immuns stables avec des cellules dendritiques infectées chargées de cet OVAp spécifique. La dynamique des bactéries exprimant la protéine fluorescente verte (GFP) pendant la transmission des cellules DC-T peut être surveillée par imagerie de cellules vivantes et la quantification de la transinfection bactérienne peut être effectuée par cytométrie en flux. De plus, la transinfection peut être quantifiée par une méthode plus sensible basée sur l’utilisation de gentamicine, un antibiotique aminoglycoside non perméable tuant les bactéries extracellulaires mais pas les bactéries intracellulaires. Cette méthode classique a déjà été utilisée en microbiologie pour étudier l’efficacité des infections bactériennes. Nous expliquons ici le protocole de l’ensemble du processus, de l’isolement des cellules primaires à la quantification de la transinfection.

Introduction

Quand un agent pathogène infecte son hôte, il ya généralement une activation des réponses immunitaires innées et adaptatives, nécessaires à la clairance bactérienne. L'immunité innée est la première ligne de défense qui empêche la plupart des infections. L'immunité innée distinguer dans un des éléments précis de façon qui sont conservés parmi les grands groupes de micro-organismes (motifs moléculaires associés à des pathogènes, PAMP) ^1. Les mécanismes de l'immunité innée sont les barrières physiques telles que la peau, les barrières chimiques (des peptides antimicrobiens, lysozyme) et les leucocytes innées, qui incluent les phagocytes (macropha....