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Article de méthode

Conçu vascularisé Muscle Flap

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DOI :

10.3791/52984

11 janvier 2016

* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

À ce jour, les défauts des tissus épais sont généralement reconstruits par l’application de lambeaux de tissus autologues ou de tissus modifiés. Dans ce protocole, nous présentons une nouvelle méthode d’ingénierie d’un lambeau de tissu vascularisé portant un pédicule autologue, pour servir de substitut aux lambeaux autologues.

Résumé

L’un des principaux facteurs limitant l’épaisseur d’une construction tissulaire et sa viabilité et son applicabilité in vivo, est le contrôle de l’apport d’oxygène au microenvironnement cellulaire, car la diffusion passive est limitée à une couche très mince. Bien que divers matériaux aient été décrits pour restaurer l’intégrité des défauts de pleine épaisseur de la paroi abdominale, aucun matériau ne s’est encore avéré optimal, en raison d’une faible vascularisation du greffon, d’un rejet tissulaire, d’une infection ou de propriétés mécaniques inadéquates. Ce protocole décrit un moyen d’ingénierie d’un lambeau entièrement vascularisé, d’une épaisseur pertinente pour la reconstruction du tissu musculaire. Des constructions d’acide polylactique et d’acide polylactique co-glycolique intégrées dans des cellules sont implantées autour de l’artère fémorale et de la veine de la souris et maintenues in vivo pendant une période d’une ou deux semaines. Le greffon vascularisé est ensuite transféré sous forme de lambeau vers un défaut de pleine épaisseur réalisé dans l’abdomen. Cette technique remplace la nécessité de sacrifications de tissus autologues et peut permettre l’utilisation de lambeaux vascularisés conçus in vitro dans de nombreuses applications chirurgicales.

Introduction

Les défauts de la paroi abdominale surviennent souvent à la suite de traumatismes graves, le traitement du cancer, des brûlures et l'enlèvement de maille infecté. Ces défauts impliquent souvent la perte de tissu importante, nécessitant des interventions chirurgicales complexes et présentant un défi majeur pour les chirurgiens de reconstruction plastique 1-4. Les chercheurs de l'ingénierie tissulaire qui cherchent de nouvelles sources de tissus artificiels ont exploré différents matériaux, sources de cellules et facteurs de croissance. Restaurations réussies de divers tissus, tels que le 5,6 trachée, de la vessie 7, 8

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Protocole

Toutes les études sur les animaux ont été approuvés par le Comité de l'éthique des expériences sur animaux du Technion. Pour cette procédure, les souris nude athymiques ont été utilisés pour éviter le rejet immunologique. Si l'on utilise un autre type de souris, les souris doivent être rasées avant l'intervention chirurgicale et l'administration de la cyclosporine (ou un autre anti-rejet de remplacement) est recommandée.

1. Préparation Échafaudages et Cell Embedding

  1. Préparer des échafaudages constitués de mélange 1: 1 de poly-L-lactique-acide (PLLA) et de polylactique-co-glycolique-acide (PLGA), de la manière su....

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Résultats

La vascularisation du greffon et de la perfusion in vivo

Les greffons ont été implantées une ou deux semaines avant leur transfert comme volets axiaux. À une et deux semaines après l'implantation, l'observation brut de la zone de greffe révélé greffes de tissus viables et vascularisées. Ces greffes se sont avérées hautement vascularisé, tel que déterminé par immuno-coloration de CD31 positive (Figure 1A), et très perfusé, comme en témoigne injection veine ca.......

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Discussion

Les progrès de l'ingénierie tissulaire ont été atteints avec une demande croissante pour les tissus de substitution pour la reconstruction de divers types de tissus. Une variété de 1,17,18 synthétiques et biologiques 14-16 matériaux ainsi que les méthodes de fabrication ont été évalués pour leur capacité à répondre à ces demandes. Cependant, malgré les progrès dans les soins cliniques et en ingénierie tissulaire, la restauration des défauts de pleine épaisseur paroi abdominale reste un défi. Un.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.

Remerciements

Cette recherche a été financée par la subvention du Conseil européen de la recherche FP7 281501, ENGVASC.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
petites ciseaux droites finesFine Science Tools (FST)14090-09
ciseaux à ressortFine Science Tools (FST)15003-08
pince droite à pointe fineFine Science Tools (FST)11251-20
pince dentée  ;Fine Science Tools (FST)11050-10
porte-aiguilleFine Science Tools (FST)12500-12
Cautériseur pour petits récipients  ;Fine Science Tools (FST)18000-00
DuratearsAlcon5686
SedaxylanEuravetDJ03
Clorketam 1000Vetoquinol4A0726B
BuprénorphinevetmarketB15100
4-0 sutures en soieAssut sutures647
6-0 sutures en polypropylèneSutures enAssut 9351F
8-0 Sutures en soieSutures Assut684568
Seringue à insuline (aiguille de 6 mm)Systèmed’échographie
Vevo 2100VisualSonics inc.
Sonde non linéaire MS250VisualSonics inc.
Micromarqueur agent de contraste non cibléVisualSonics inc.VS-11694
VisualSonics inc.VS-11912
Logiciel Vevo 2100VisualSonics inc.
fluorescéine isothiocyanate conjugué dextranSigmaFD500S
MatlabMathworks, MA, USA
KimwipesKimtech34120
solution de démasquage de l’antigèneVector laboratoriesH-3300
anticorps anti-CD31Abcam  ;ab28364
chèvre biotinylée anticorps anti-lapin (secondaire)Laboratoires de vecteursBA-1000
streptavidine-peroxydaseJackson  ;016-030-084
Solution d’hamatoxyline de MayerSigma-AldrichMHS-16
kit de substrat aminoéthylcarbazole (AEC)Life technologies, Invitrogen  ;00-2007
VectamountVector laboratoriesH-5501
soie haute résolution BD 324911 Cathéter de veine cathétrique de veine caudale

Références

  1. Engelsman, A. F., van der Mei, H. C., Ploeg, R. J., Busscher, H. J. The phenomenon of infection with abdominal wall reconstruction. Biomaterials. 28 (14), 2314-2327 (2007).
  2. De Coppi, P., et al. Myoblast-acellular ....

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Réimpressions et autorisations

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