L’utilisation d’un dispositif simple pour couper et « rouler » des intestins de souris afin de préparer rapidement des préparations entières est décrite.
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Article de méthode
Un dispositif simple d'élaborer rapidement entiers Monts de l'intestin de souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
Préparation montures entières de l'intestin grêle et le côlon de la souris pour l'analyse ou la quantification ultérieure peut être longue et difficile. Nous décrivons l'utilisation d'un dispositif simple de couper et les intestins 'roll' de la souris pour préparer rapidement les préparatifs entiers de montage de qualité supérieure et uniforme à ce qui peut être réalisé à la main. Le dispositif comprend une base qui contient 4 tiges en acier inoxydable et une partie supérieure, qui sert de guide de coupe. Les tiges sont insérés dans le lumen de l'intestin grêle [divisé en tiers] et le côlon. Les tiges et les échantillons sont ensuite placés sur un morceau de papier ou de carton filtre dans les fentes de retenue dans la base de l'appareil. La partie supérieure du dispositif est alors positionné et sert de guide de coupe. Les deux sections inclinées dans le centre de la pièce supérieure sont utilisés pour guider un couteau ou un scalpel et les intestins coupés longitudinalement sur la partie supérieure des tiges. Une fois les sections intestinales ont été coupés, le supérieur est retiré et la carte, tissue et les tiges délicatement retiré de l'appareil et placé sur le banc. Les tiges sont ensuite roulées délicatement sur le côté pour aplatir et coller les segments intestinaux sur la pièce sous-jacente de papier ou de carton filtre. La préparation finale peut ensuite être examinée et fixée ou stockée pour une analyse ultérieure. Les préparatifs sont très précieux pour l'étude des changements dans les modèles intestinales normales ou génétiquement modifiées souris. Les préparations ont été utilisées pour l'étude et la quantification des effets de l'inflammation (colite), des dommages, des lésions pré-cancéreuses (foyers de cryptes aberrantes (ACF) et mucine foyers (MDF) appauvri) et des polypes ou des tumeurs.
Introduction
La souris et la souris génétiquement modifiée 1-3 sont un modèle inestimable pour l'étude de diverses pathologies cancéreuses en particulier et de sa relation à l'inflammation dans le tractus gastro-intestinal. Cela nécessite souvent la préparation de supports entiers de l'intestin grêle et / ou du côlon.
La préparation des montures entières peut être fait avec une paire de ciseaux de décalage de précision, mais il peut prendre environ 20 minutes par souris 4. Ce ne sont pas très pratique pour des études comparatives, qui nécessitent une quantité importante de souris (disons 10 par groupe soumis à une ana....
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Protocole
Les différentes procédures expérimentales et l'euthanasie sont approuvés par le comité d'éthique institutions d'accueil et par les organismes de réglementation appropriés. L'euthanasie est normalement effectuée en utilisant CO 2 asphyxie suivie par dislocation cervicale.
1. Dispositif
- Machine de la partie principale de la base de l'appareil à partir d'un bloc solide de résine acétyl-haute densité, tel que décrit dans ce manuscrit. A chaque extrémité de créer 3 mm de haut-élevé bandes, et une partie machine hors de ces 2,5 mm bosquets de prendre les tiges (voir la figure 2 et la fi....
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Résultats
Les polypes sont faciles à identifier sous un stéréomicroscope avec une source de lumière froide à l'autre illuminer le tissu (Figure 4). Il est utile de marquer la carte avec les marques de crayon quand un polype est observée afin que la notation peut être discuté plus tard et différents opérateurs peut parvenir à un accord. Le tissu peut également être teinté vrac [au bleu de méthylène] pour identifier les foyers de cryptes aberrantes 8 ou mucine foyers appauvri (MDF) 9 par l.......
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Discussion
Le dispositif accélère grandement le processus de sorte que deux opérateurs peuvent autopsie complète d'une souris dans 6 min. Cela inclura un contrôle visuel pour les lésions macroscopiques évidentes et de pesage et fixant les principaux organes. Il permettra également aux opérateurs de rincer, Blot et pèsent l'estomac, le caecum, l'intestin grêle et du côlon et de préparer l'ensemble des supports. Le tissu aplati peut être fixé très rapidement et ainsi éviter des artefacts de dégradation.
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
L’évolution du dispositif a commencé avec un prototype de coupe quelque peu différent présenté au club de souris de l’Imperial Cancer Research Fund (ICRF) par Bass Hassan, à la suite de cela, il y a eu plusieurs discussions avec Rob Rudling et Nikki Mandir dans l’installation de confinement de l’ICRF Clare Hall. Jo Kitau de l’atelier mécanique de l’ICRF a construit les versions initiales et Andy Lucas a conçu et perfectionné le modèle final dans l’atelier CRUK à Oxford.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Delrin | Ryan Plastics, Earls Barton, Royaume-Uni | Un matériau similaire à la résine acétal haute densité suffirait à la | |
| plaque de Duralumin | Metal Supplies Ltd, Park Road, Dukinfield. SK16 5LP UK | Aluminium permet de dater de 1909 afin que des fournisseurs alternatifs soient disponibles. | |
| Dispositif(s) fini(s) prêt à l’emploi | Contactez le Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk r.goodlad@imperial.ac.uk | pour plus de détails sur l’approvisionnement |
Références
- Goodlad, R. A. Cancer Handbook. Alison, M. R. , John Wiley and Sons, Ltd. 243-262 (2007).
- Ward, J. M., Treuting, P. M. Rodent intestinal epithelial carcinogenesis: pathology and preclinical models. Toxicol Pathol. 42, 148-161 (2014).
- Sundberg, J. P., Hogenesch, H., Nikitin, A. Y., Treuting, P. M., Ward, J. M.
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Réimpressions et autorisations
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