Le bm12 inductible modèle du lupus érythémateux disséminé (SLE) dans C57BL / 6

Résumé

Le transfert de lymphocytes bm12 chez un receveur C57BL/6 est un modèle établi de lupus érythémateux disséminé. Nous décrivons ici comment initier une maladie à l’aide de ce modèle et comment caractériser les cellules auxiliaires folliculaires T, les cellules B du centre germinatif et les plasmocytes par cytométrie en flux.

Résumé

Le lupus érythémateux disséminé (LED) est une maladie auto-immune aux manifestations cliniques et immunologiques diverses. Plusieurs modèles animaux spontanés et inductibles reflètent des composantes communes de la maladie humaine, y compris le modèle de transfert bm12. Lors du transfert de splénocytes bm12 ou de lymphocytes T CD4 purifiés, les souris C57BL/6 développent rapidement de grandes fréquences de cellules T auxiliaires folliculaires (Tfh), de lymphocytes B du centre germinatif (GC) et de plasmocytes suivis de niveaux élevés d’anticorps antinucléaires circulants. Étant donné que ce modèle utilise des souris sur un fond C57BL/6 pur, les chercheurs peuvent rapidement et facilement étudier la progression de la maladie chez les souches de souris transgéniques ou knock-out dans un laps de temps relativement court. Nous décrivons ici des protocoles pour l’induction du modèle et la quantification des cellules Tfh, des cellules B GC et des cellules plasmatiques par cytométrie en flux multicolore. Il est important de noter que ces protocoles peuvent également être utilisés pour caractériser la maladie dans la plupart des modèles murins de LED et identifier les lymphocytes Tfh, les lymphocytes B GC et les plasmocytes dans d’autres modèles de maladies.

Introduction

Le lupus érythémateux disséminé (SLE) est une maladie auto-immune complexe caractérisé prototypiquement par l'anticorps anti-nucléaire (ANA) et de la production glomérulonéphrite. De nombreux autres séquelles, y compris dermique, cardio-pulmonaire, et des lésions hépatiques sont associés à la maladie chez certains individus. Les estimations de prévalence aux États-Unis varient considérablement, de ^1,2 150,000-1,500,000, avec incidence particulièrement élevée chez les femmes et les minorités ^3. Bien que l'étiologie de la SLE a été difficile à discerner, il est pensé pour résulter de l'interaction de divers facteurs génétiques et envir....

Protocole

Travaux d'animaux a été réalisée dans des conditions exemptes d'organismes pathogènes spécifiques conformément aux lignes directrices établies par l'Association pour l'évaluation et l'accréditation des animaux de laboratoire Care International et notre institutionnel de protection des animaux et l'utilisation Comité (IACUC).

NOTE: Incorporer des souris exprimant un marqueur congéniques CD45.1 tels que le donateur ou animaux receveurs si possible, car cela permet à la surveillance de l'efficacité de greffon du donneur et l'expansion spécifique de la population T CD4 de la cellule donneuse. Si vous envisagez ....

Résultats

Souris malades développent une splénomégalie en aussi peu que 14 jours, présentant les rates 2-3 fois la taille de souris saines en termes de masse et de la cellularité (Figure 2).

Les splénocytes sont séquentiellement débloqué diffusion de la lumière (FSC-A par SSC-A), l'élimination des doublets (FSC-W ou -H par le FSC-A), les cellules viables (faible coloration de la viabilité colorant) et CD4 ⁺ TCRβ ⁺ (Figure 3A). Les cellules do.......

Discussion

Le modèle inductible de BM12 est un moyen relativement simple et efficace pour étudier les processus cellulaires et moléculaires de SLE. L'activation chronique des cellules T CD4 par transfert adoptif dirigés contre les antigènes du soi conduit à l'accumulation de Tfh, GC cellules B, les cellules plasmatiques et qui peut être mesurée par cytométrie en flux, comme décrit ici. Les futures études utilisant ce modèle peut rapidement et facilement interroger le rôle des gènes candidats et de nouvelles thérapies dans .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
N° B6. SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ	The Jackson Laboratory	001162	CD45.1+ BoyJ souris souche
B6(C)-H2-Ab1bm12/KhEgJ	The Jackson Laboratory	001162	Bm12 souche de souris
FastDigest PsuI	Life Technologies	FD1554	Restriction digest enzyme pour le génotypage
1X RBC Lysis Buffer	eBioscience	00-4333-57
IMDM	GE Healthcare	SH30228.01
Tube de séparation du plasma (PST)	Tube	de	prélèvement sanguin BD 365974 avec EDTA dipotassique
Tube de séparation du sérum (SST)	Tube	de	prélèvement sanguin BD 365967 avec activateur de caillot / Gel SST
Ficoll	GE Healthcare	17-1440-02  ;	Solution de séparation de cellules à haute densité
Lympholyte-M	Cedarlane	CL5030	Solution de séparation cellulaire haute densité
GL-7-biotine	eBioscience	13-5902-82  ;
Streptavidin-BUV395	BD	564176
CD138-BV421	BioLegend	142508
CD4-BV510	BioLegend	100559
TCR&beta ;-BV605	BD	562840
CD45.1-BV711	BioLegend	110739
CD45.2-FITC	BioLegend	109806
-1-PE	BioLegend	135206
CD19-PerCP	BioLegend	115532
Fas-PE-Cy7	BD	557653
CXCR5-APC	BioLegend	145506
Fixable Viability Dye ef780	eBioscience	65-0865-18
CD4-BV421	BioLegend	100443
inserts de tube FACS de 1,2 ml, rack	USA Scientific	1412-1400
BD Falcon&trade ; Tubes à fond rond	BD	352017