Cette méthode évalue l’invasion des cellules cancéreuses des sphéroïdes dans une matrice 3D environnante. Les sphéroïdes sont générés par la méthode de culture de gouttes suspendues, puis intégrés dans une matrice composée de matériaux de membrane basale et de collagène de type I. L’invasion des sphéroïdes est ensuite surveillée.
Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.
Article de méthode
Une cellule cancéreuse Spheroid test pour évaluer Invasion dans un Cadre 3D
Dans cet article
Résumé
Résumé
La nature invasive des lignées cellulaires cancéreuses est censée être corrélée à leur potentiel métastatique. Cependant, la plupart des tests traditionnels n’examinent pas ces caractéristiques invasives dans un environnement tridimensionnel et les données qui en résultent souffrent d’une applicabilité biologique réduite. Ici, une approche est présentée pour visualiser la capacité invasive des lignées cellulaires dans un cadre physiologiquement pertinent. Le test d’invasion de sphéroïdes de cellules cancéreuses utilise d’abord la gravité pour générer des sphéroïdes dans des gouttes de milieu suspendues au couvercle d’une boîte de culture cellulaire. Ensuite, ces sphéroïdes sont intégrés dans une matrice 3D composée d’un mélange de matériaux de membrane basale et de collagène de type I. La sortie des cellules cancéreuses des sphéroïdes vers la matrice environnante est ensuite surveillée au fil du temps. La méthode décrite ici peut être modifiée pour examiner l’invasion après coculture de différents types de cellules, l’inclusion de médicaments/inhibiteurs ou l’altération des constituants de la matrice extracellulaire (MEC).
Introduction
Il est établi que la motilité des cellules cancéreuses est un facteur prédictif de potentiel métastatique, étant donné qu'un tel comportement facilite invasion à travers la membrane basale et l'entrée dans le système circulatoire 1. La plupart des recherches sur la motilité a mis l'accent sur la façon dont les cellules se comportent dans un (2D) paramètre à deux dimensions, mais il est en plus largement reconnu que le mouvement des cellules dans une matrice tridimensionnelle (3D) est plus représentatif de la façon dont ces mêmes cellules seront effectivement se comporter deux in vivo. Des systèmes de culture 3D de plus en pl....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Protocole
1. Génération de Sphéroïdes
- Préparer une suspension de cellules isolées pour accrocher des cultures de goutte à détacher des cultures de cellules adhérentes cancer de ~ 70% de confluence en utilisant un WASH PBS suivi par l'exposition à la solution de trypsine-EDTA à 0,05%.
- Neutraliser la solution de trypsine avec des milieux de culture de cellules et compter les cellules en utilisant une aliquote de la suspension cellulaire. Remarque: Les milieux de culture cellulaire spécifique dépendra de la lignée cellulaire testée. Suivre ATCC recommandations de média, où le milieu de culture cellulaire est généralement DMEM + 10% de FBS. Plus d'infor....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Résultats
En utilisant le dosage d'invasion sphéroïde (figure 1), un panel de lignées cellulaires du cancer a été testé pour leur aptitude à former des sphéroïdes, ainsi que pour la quantité de sortie de la cellule exposée après l'implantation dans une matrice 3D constitué de matériaux de membrane de sous-sol et de collagène de type I (Tableau 1). Ces résultats démontrent que chaque lignée cellulaire de cancer va créer sphéroïdes bien formés, où les lignes de cellules possédant une morpho.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Discussion
Cette étude a évalué la performance d'un panel de lignées cellulaires cancéreuses dans un test d'invasion sphéroïde (tableau 1). En règle générale, nous constatons que la formation sphéroïde est renforcée dans les plus lignées de cellules épithéliales prospectifs, où la présence de jonctions cellule-cellule favorise la formation d'une architecture sphéroïde-like. Connus lignes de cellules qui ont subi une transition épithélio-mésenchymateuse, comme MDA-MB-231 cellules ne forment pas des sphé.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Déclarations de divulgation
Les auteurs déclarent qu’ils n’ont pas d’intérêts financiers concurrents.
Remerciements
Pris en charge par le NIH subventions P30 CA051008 et CA009686 T32 (ATR).
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Matrigel Facteur de croissance réduit | Corning | CB-40234 | |
| Collagène de type I, queue de rat, 100 mg | Millipore | 08-115 | |
| DMEM | Life Technologies | 11995-065 | |
| RPMI 1640 Moyen ; | Life Technologies | 11875-093 | |
| PBS | Life Technologies | 10010-023 | |
| 0,05 % Trypsine-EDTA | Life Technologies | 25300-054 | |
| Sérum fœtal de bovin, inactivé à la chaleur | Omega Scientific | FB-12 | |
| 100 mm Plats traités TC | Corning Incorporated | 430167 | |
| 24 puits TC Plaques traitées | NEST Biotechnlologie | 702001 | |
| inversé Olympus IX-71 | |||
| Les lignées cellulaires ont été maintenues en DMEM + 10 % FBS, avec l’attente de cellules BT-474 et LNCaP, qui ont été maintenues en RPMI + 10 % FBS. |
Références
- Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Metastasis: Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nat Rev. Cancer. 2 (8), (2002).
- Schmeichel, K. L., Bissell, M. J. Modeling tissue-specific signaling and organ function in three dimensions.
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Réimpressions et autorisations
